天津市梅江中学高中生物选修三教学课件：基因工程程序.pptVIP

一、基因工程别名、操作对象、操作水平、操作环境、实质或原理各是什么 二、限制酶的作用 2、目的基因的获得方法： ①从基因文库获取目的基因 未知序列 ②利用PCR技术扩增目的基因 ③通过化学方法直接人工合成 ②利用PCR技术扩增目的基因 原理：DNA双链复制的原理 过程：热解旋（90 ℃ －95℃）→引物与单链互补结合（55 ℃ －60℃） →DNA聚合酶作用下延伸（70 ℃ －75℃） 条件：DNA模板、引物、DNA聚合酶、四种脱氧核苷酸 ③通过DNA合成仪直接人工合成 条件： 基因比较小且已知其序列 根据蛋白质的氨基酸顺序推算出信使RNA核苷酸顺序，然后按照碱激互补配对原则，推算出基因DNA的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。 将目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法（感染双子叶植物和裸子植物，对大多单子叶植物没有感染力） 基因枪法（常用于单子叶植物） 花粉管通道法（转基因抗虫棉） 将目的基因导入动物细胞 显微注射技术（“超级小鼠”） 将目的基因导入微生物细胞 导入大肠杆菌的方法：钙离子处理法 首先用Ca2+ 处理细胞,以增大细菌细胞壁的通透性,使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,这种细胞称为感受态细胞. 第二步是将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子,完成转化过程. 第三步目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因。 检测是否插入了目的基因 原理：分子杂交技术 过程：将转基因生物的基因组DNA提取出来→标记目的基因作探针→使其杂交 检测是否转录出了mRNA 原理：分子杂交技术 检测是否翻译成蛋白质 原理：抗原--抗体杂交 个体生物学水平的检测 （做抗虫或抗病的接种实验） 1.运用现代生物技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因整合到棉花细胞中，为检测实验是否成功，最方便的方法是检测棉花植株是否有（　） A.抗虫基因　　B.抗虫基因产物 C.新的细胞核　D.相应性状 2.转基因动物转基因时的受体细胞是（　） A.受精卵　　　B.精细胞　　　 C.卵细胞　　　D.体细胞 3.人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工合成，通过转基因技术，可以使人 的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是（　） A.大肠杆菌　 B.酵母菌 C.噬菌体　 D.质粒DNA * * * 专题1 基因工程 三、DNA连接酶的作用 四、运输基因的载体必须具备的条件 五、DNA连接酶有连接单链DNA的本领吗 六、DNA连接酶与DNA聚合酶的异同 基因工程的操作程序主要包括四个基本步骤： 1）目的基因的获取 2）基因表达载体的构建 3）将目的基因导入受体细胞 4）目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取 1、目的基因的概念：目的基因是人们所需要转移或改造的基因,主要是指编码蛋白质的基因。 如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。 已知序列 ①从基因文库中获取目的基因： 基因文库: 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库(gene library) 基因组文库: 基因文库中包含了一种生物所有的基因,这种基因文库叫做基因组文库. 部分基因文库: 基因文库中包含了一种生物的一部分基因,这种基因文库叫做部分基因文库. 二、基因表达载体的构建 1、过程： 1）用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个切口，露出黏性末端。 2）用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端。 3）将切下的目的基因片段插入质粒的切口处，再加入适量DNA连接酶，形成了一个重组DNA分子（重组质粒） 目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。 2、目的： ①使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以复制遗传给下一代 ②使目的基因能表达和发挥作用 3、组成：目的基因；启动子；终止子； 标记基因 启动子 终止子 目的基因 标记基因 三、目的基因导入受体细胞---转化 1、