米糠中阿魏酸的提取及荧光分光光度法检测剖析.pptVIP

* * * * * * * * * Here comes your footer ? Page * 米糠中阿魏酸的提取及荧光分 光光度法检测 文章引自：食品科学 2007年 第28卷 第3期 廖 律，周明达 ，肖 劲 中南大学化学化工大学 Page * 摘要 确定了新鲜米糠中阿魏酸的最佳提取工艺。采用高效液相色谱法对提取产品的定性检测，荧光分光光度法对提取产品的定量检测。 此法具有准确、简便、快速、灵敏等优点。 Page * 引言 阿魏酸(Ferulic acid，简称FA)的化学名称为4-羟基-3甲氧基-2-苯丙稀酸，其广泛存在于植物细胞壁中，多以酯的形式存在，游离态的阿魏酸含量很低。 Page * 引言 目前，从天然植物体中直接提取阿魏酸的方法主要为碱解提取法和生物提取法，对阿魏酸的检测研究多使用高效液相色谱法及紫外可见分光光度法，目前采用荧光光度法对阿魏酸进行检测所做的研究很少。 Page * 引言 由于阿魏酸自身可激发出荧光，采用荧光分光光度法可直接进行测定，具有简便易行，准确度高, 重现好的特点。 高效液相色谱法是目前较为先进的分析手段，具有灵敏度高和重复性好等优点，但高效液相色谱仪价格昂贵，限制了其广泛应用。紫外可见分光光度法测定简便，但是易受其它成分干扰，准确度较差。 1 实验部分 1 仪器与试剂 仪器： 日本日立FL-4500 荧光分光光度计； 800B 离心机； 高效液相色谱仪(LC-2010A) Page * Page * Page * Page * 试剂： 新鲜米糠 ；阿魏酸 ； 氢氧化钠 ； 无水乙醇 ； 乙酸乙酯 ； 碳酸钠； 无水亚硫酸钠； Page * 取新鲜米糠50g，加入350ml水煮沸10min，以除去米糠中的悬浮杂质，并使阿魏酸易于释放出来，然后加入3倍的无水乙醚(W/V)浸渍2次，每次3h，脱去米糠中的脂。预处理后的米糠挤压过滤，水洗两次，弃滤液，滤渣置于500ml圆底烧瓶中，加入一定比例的碱和乙醇以及少量无水亚硫酸钠，在85℃下回流一定时间，再次挤压过滤，滤渣水洗两次，合并滤液，用浓盐酸调pH值为2.5左右，抽滤，取一定量上清液，在4000r/min下离心分离5min，以乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯萃取液，减压蒸馏至乙酸乙酯全部分出，残渣为阿魏酸晶体。 2 阿魏酸的提取 3 定性定量检测 液相色谱定性检测 荧光光度法定量检测 Page * 液相色谱定性检测 按选定的色谱条件测定，得到标准品溶液和样品溶 液色谱图见图1和图2 。由图可见，阿魏酸的保留时间约为15.6min Page * 荧光光度法定量检测 1 激发波长与发射波长的确定 精确称量0.2mg 标准阿魏酸，以2% Na2CO3 溶液定容于100ml 容量瓶中，室温下荧光扫描得阿魏酸的标准品激发波长为344nm，发射波长为462nm。比色皿厚度为2cm，2% Na2CO3 为空白溶液，激发光和发射光狭缝宽度均为5.0nm，扫描速度为240nm/min。 Page * 荧光光度法定量检测 2 线性范围的确定与标准曲线的绘制 精密量取适量标准溶液配置成0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0、2.2μg/ml 的标准溶液，以对照品浓度(μg/ml)为横坐标，以光强为纵坐标，进行线性回归，在0.2～2.2μg/ml 范围内，浓度 与光强呈良好的线性关系，回归方程为：y=43.47143+224.41071x，相关系数r=0.99957。标准曲线如图 Page * 荧光光度法定量检测 3 样品制备与测定 取5ml阿魏酸样品上清液，乙酸乙酯萃取三次(每次5ml)，合并乙酸乙酯萃取液，再用2%碳酸钠溶液萃取三次(每次5ml),合并碳酸钠溶液。以2%碳酸钠溶液定容至50ml容量瓶中。精密量取2ml上述溶液，再以2%碳酸钠溶液定容至100ml容量瓶中，照荧光光度法测定光强(平行测定n=5)，其结果见表1。 Page * 荧光光度法定量检测 为了验证实验的准确性，在已知浓度的适量样品溶液加入一定量的阿魏酸标准溶液，按上述方法处理和实验，计算回收率，其结果见表2 。 由表2可知，荧光分析法测定米糠提取出来的阿魏酸的平均回收率在98.4%至101.1% 之间。 4 结果与讨论 1 阿魏酸的测定方法有很多种，由于荧光分光光度法测定的同时限定了最大激发波长和最大发射波长2个测定参数，故而可排除一些其他的化学物质的干扰，具有灵敏度高，重现性好，快速简便等特点。 Page * 2 采用一定比例的氢氧化钠和无水乙醇为提取溶剂，可以一定程度上增加阿魏酸的提取率，余下的米糠残渣经水处理后可以