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丙型肝炎病毒抗体检测（酶联免疫法） 1、原理：本法采用间接法酶联免疫吸附试验原理。在微孔条上预包被基因重组HCV结构和非结构区，配以酶标记IgG抗体及TMB显色等其他试剂，检测人血清或血浆中的丙型肝炎病毒抗体。 2、标本采集与处理? 2.1 受检者准备：对于体检对象抽血前保持平时的饮食习惯，采血前应禁食4-6小时。 2.2静脉采血：除非是卧床病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，因此影响测定水平。故在采血前至少应静坐５分钟。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过１分钟，穿刺成功后立即松开止血带。 2.3采血管：一般采用血清做检验，可以用一般洁净的塑料管或玻璃试管作为容器。 2.4标本处理：血液标本应尽快地送实验室。本试剂使用样品为人血清或血浆，含EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实验。 2.5标本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求(要求密封、无溶血、无杂物)、所用试管是否正确、试管是否填写完整、并问讯采血日期，对不合格标本应退回重采，并填写记录。 2.6标本储存：样品中应无微生物，可在2-8oc储存1周，长期储存应低温冻存，避免反复冻融。 3、试剂与仪器：? 3.1测定试剂： 3.1.1生产厂商：北京万泰生物药业股份有限公司 3.1.2批准文号：国药准字3.1.3包装：96T×1 3.1.3试剂配置： 浓缩洗涤液 50ml×1瓶 样品稀释液 12ml×1瓶 HCV酶标板 8×12孔或12×8孔 HCV酶标试剂 12 ml×1瓶 HCV阳性对照 0.2ml×1支 HCV阴性对照 0.2ml×1支 底物液A、B液 各6ml×1瓶 终止液 6ml×1瓶 自封袋 1个 封版膜 2张 说明书 1份 3．2测定仪器： 3.2.1酶标仪： 上海安泰model MT-858 3.2.2洗板机： ANALYTECH 828 4、操作步骤： 4．1配液：浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。 4．2编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔（空白对照孔只加稀释液不加样品及酶标试剂）其余各孔加入100UL样本稀释液。 4．3 加样：分别在相应孔中加入待测样品，阴，阳对照10微升，轻轻振荡混匀。 4．4温育：用封版膜封版后，置37oc温育60分钟。 4．5 洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。 4．6加酶标抗体：空白对照孔不加 酶标试剂，每孔加入酶标记抗体100微升，轻轻振荡混匀。 4．7温育：置37oc温育30分钟。 4．8洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干 4．9 显色：每孔加入显色剂A，B液各1滴（50微升），轻轻振荡匀，37oc避光显色30分钟。 4．10终止：每孔加终止液1滴（50微升），轻轻振荡混匀。 4．11测定：10分钟内测定结果，设定酶标仪单波长450 nm或双波长450 nm /600-650 nm测定。用空白孔调零点后测定各孔A值。 5：5．1目测： 在白色背景下观察各孔显色情况，者为为。5．2酶标仪检测： 5．2．1临界值（CUT/OFF）计算：CUT/OFF=阴性对照孔A均值+0.12。（不足0.02按0.02计算） 5．2．2阳性判定：样品A值≥临界值（CUTOFF）者判为抗HCV阳性。(注意初试阳性应重新取样双孔复试) 5．2．3阴性判定：样品A值临界值（CUTOFF）者判为抗HCV阴性。 6：6．6结果判定必须以酶标仪读数为准。读取结果时，应擦干酶标板底部，且孔内不能有气泡。不要触碰孔底部的外壁，指印或划痕都可能影响板孔的读值。 6．7所有样品、废液和废弃物都应按传染物处理。终止液为硫酸，使用时必须注意安全。 6．8显色时必须加显色剂A液后再加显色剂B液，以免显色过低。 6．9由于ELISA反应原理的限制，本试剂检测阴性并不排除HCV感染的可能。检测的阳性结果必须结合临床信息进行分析。 7：： 梅毒螺旋体抗体（酶联免疫法） 1、原理：本试剂盒采用双抗原夹心法酶联免疫吸附试验原理。在微孔