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动物细胞工程 动物细胞工程 体细胞核移植技术存在的问题 胚胎移植-动物幼体产出 概率<10% 克隆动物存在着健康问题 克隆动物的食品安全性问题存在争议 P50 思考与讨论 世界上第一只克隆羊“多莉”的培育过程如图所示,请据图回答: * 动物细胞工程技术与植物细胞工程技术的原理基本相同 常用的技术手段 动物细胞培养 核移植 胚胎移植 单克隆抗体 动物细胞融合 一、动物细胞培养 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 胰蛋白酶 (分解弹性纤维、胶原蛋白) 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 细胞株 无限传代 细胞系 遗传物质改变 遗传物质未改变 动物细胞培养的条件: 无菌、无毒的环境 培养液和所有培养用具进行无菌处理 措施:培养液中加抗生素,定期更换培养液 营养 糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子(维生素、激素等)和动物血清 温度和PH 36.5±0.5℃ 7.2-7.4 气体环境 O2 CO2 95%空气 5%的CO2 思考: 2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料? 1、动物细胞培养液的主要成分是什么?较植物组织培养基有何独特之处? 3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞? 4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体? 主要成分:葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有:1、液体培养基 2、成分中有动物血清等 因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛,分裂能力强 成块组织不利培养,分散了做成细胞悬浮液利于培养 不能,动物细胞培养只能使细胞数目增多,不能发育成新的动物个体 动物细胞培养技术的应用 1、获得细胞产物,如蛋白质生物制品-病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等 2、获得烧伤病人植皮所需的细胞 3、获得细胞用于检测有毒物质 二、核移植技术 克隆羊培育过程 黑面绵羊去核卵母细胞 白面绵羊乳腺细胞核 细胞核移植 重组细胞 电脉冲刺激 早期胚胎 胚胎移植 另一头绵羊的子宫 妊娠、出生 克隆羊多利 体细胞核移植 胚胎细胞核移植 (MⅡ卵母细胞) 减数第二次分裂中期 去核的卵母细胞 供体细胞注入去核卵母细胞 受体细胞激活,完成减数分裂、发育 胚胎移植 P49 动物体细胞核移植技术 将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育成动物个体 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物 体细胞核移植技术的应用前景 畜牧业、医药卫生以及其他领域有着广泛应用前景 1加速家畜遗传改良进程,促进优良畜群繁育 2保护濒危物种,增加动物 的存活数量 3可作为生物反应器,生产医用蛋白 克隆动物细胞、组织、器官可作为移植的供体 了解胚胎发育及衰老过程、做疾病模型等 二、动物细胞融合(细胞杂交)-2个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程 细胞A 细胞B 杂种细胞 灭活的病毒 物理法 化学法 仙台病毒 疱疹病毒 新城鸡瘟病毒 用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程 细胞核 病毒颗粒 细胞核 动物细胞的融合与植物细胞之间融合 植物细胞杂交与动物细胞杂交的比较 动物 植物 用途 诱导手段 方法 原理 比较 项目 细胞膜 流动性 去壁原生质体融合 细胞分散 细胞融合 物理 化学 物理 化学 生物 克服远缘杂交不亲合 制备单克隆抗体 读下面一段文字资料,思考以下问题: 长期以来,为了获得抗体,采用的是把某种抗原反复注射到动物体内,然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体,不仅产量低,而且抗体的特异性差,纯度低,反应不够灵敏。人们发现,在动物发生免疫反应的过程中,体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体,但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体,必须用单个B细胞进行无性繁殖,即克隆。 怎样才能获得单克隆抗体? 仅用细胞培养技术可行吗? 我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的? 有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢? 单克隆抗体制备过程 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交细胞 细胞培养 筛选,继续培养 足够数量的、能产生特定抗体的细胞群 体外培养 注射到小鼠腹腔 单克隆抗体 思考: 1、本过程利用了哪些原理? 免疫原理,细胞融合原理和动物细胞培养原理 2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合? 这样融合成的杂交瘤细胞,继承了双亲细胞的遗传物质,不仅具有B细胞分泌抗体的能力,而且还有无限增殖的本领,因而可以获得大量单克隆抗体 单克隆抗体的应用 与常规抗体相比,单克隆抗体产量高,特异性强,灵敏度高,优越性十分明显。 1、作为诊断试剂 单克隆抗体的应用 2、用于治疗疾病和运载药物

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