广东省江门市第一中学高中生物 2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体同课异构课件2 新人教版选修3.pptVIP

动物单个细胞的获得 动物细胞虽然没有细胞壁，但细胞间的连接方式多样而复杂，在进行有效的细胞融合之前，也必需获得单个分散的细胞。 1)、组织的获得 采用各种适宜的方法处死动物，取出组织块放入小烧杯中，用剪刀将组织块剪碎成1mm3大小，用吸管吸取Hanks（平衡盐溶液之一）溶液冲下剪刀上的碎块，补加3－5ml的Hanks溶液，用吸管轻轻吸打，低速离心，弃去上清液，留下组织块。 2)、组织的消化 通过生物化学的方法将剪碎的组织块分散成细胞团或单细胞。根据不同的组织对象采用不同的酶消化液。如最常用的有胰蛋白酶和胶原酶等。其他的酶如链霉蛋白酶、粘蛋白酶、蜗牛酶等也可用于动物细胞的消化。EDTA（乙二胺四乙酸 ：二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前，用EDTA清洗细胞，以消除来自培养基中所有的二价离子。）最适合消化传代细胞，常与胰蛋白酶使用。 3)、胶原酶消化 是一种由细菌中提取的酶，对胶原和细胞间质有较强的消化作用，适用于消化纤维组织、上皮组织、癌组织等。 动物单个细胞的获得过程 （1）向培养瓶中放入1－5mm3大小的组织块，加5ml2000单位/ml的胶原酶干液，最终浓度为200单位/ml，pH=6.5。 （2）36.5℃水浴4－48小时，无需摇动，中间可更换酶液一次。 （3）当组织变软，分散于瓶底时，轻轻震荡即散成细胞团或单个细胞，小心倒出培养液。 （4）800r/min离心5分钟，弃上清液，重新悬浮BSS(缓冲平衡盐溶液)，再离心一次。 （5）加入培养液制成细胞悬浮液。 思考下列问题 1）、什么叫动物细胞融合？植物体杂交技术与动物细胞融合有什么不同呢？ 2）、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？ 3）、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？两者的融合过程和方法是否也一样？ 动物细胞融合过程 灭活病毒诱导细胞融合的原理： 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。 3、细胞融合与融合诱导细胞 融合物质： 1、抗原：概念：进入动物体内对肌体的免疫系统产生刺激作用的外源物质。包括：蛋白质、多糖、核酸、病毒、细菌、各种细胞等。特点：外源性、结构性（分子表面具有稳定的环状结构基团作为识别位点）、特异性（抗原与抗体的反应）。 动物免疫系统分泌的中和或消除抗原物质的影响的糖蛋白，存在于血清中，本质是免疫球蛋白。 3、B淋巴细胞与抗体的关系： 动物脾脏有上百万个B淋巴 细胞系，一个细胞就是一个克隆，它针对抗原上的一个抗原决定簇产生的抗体是单克隆抗体。 一种抗原通常具有多个不同的抗原决定族，因此能刺激多个B淋巴细胞产生相应的单克隆抗体，因此血清中的抗体是针对 不同抗原决定族的单克隆抗体 混合物，称为多克隆抗体。 4、单克隆抗体 如何大量生产单克隆抗体？P53 利用淋巴细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 杂种细胞的筛选 原理：两种亲本细胞融合的混合物中 可能有多种类型细胞，筛选的 目的是获得优良的杂种细胞。 1）亲本 2）同核体：同源原生质体的融合体 3）异核体：非同源的原生质体的融 合体 4）多核体：含有双亲不同比例 核物质的融合体 5）异胞质体：具有不同胞质来源的 杂合细胞。 6）核质体：有细胞核而带有少量细 胞质的亚原生质体 动物细胞的筛选方式（特定培养基）： 1）利用抗药性筛选系统： 利用生物细胞对药物敏感性差异筛选杂种细胞。 5、单克隆抗体的制备 动物免疫与亲本细胞的选择 细胞融合：淋巴细胞杂交瘤的制备 杂交瘤细胞的筛选：有限稀释法等 单克隆抗体的制备和冻存 单克隆抗体的纯化 亲本细胞的选择 骨髓瘤细胞： 骨髓瘤细胞能产生并分泌大量的免疫球蛋白，这样的瘤细胞融合后，可能影响或降低所分泌抗体的滴度，所以必须选育出非分泌免疫球蛋白缺陷型，能在体外无限繁殖和连续继代培养的 骨髓瘤细胞。 多用小鼠的骨髓瘤细胞。 1、单抗作为体内体外诊断试剂 现在已经有各种不同类型的单抗试剂在市场出售，例如乙型肝炎的表面抗原，铁蛋白、促绒毛膜性激素、促甲状腺激素、癌症、艾滋病等诊断试剂。 用同位素标记的单抗在特定的组织中