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第三章 转录及其调控 2013.10.21~28 第一节 原核生物转录 DNA聚合酶在启动DNA链延长时需要引物存在，而RNA聚合酶不需要引物就能直接启动RNA链的延长。 原核生物RNA聚合酶能直接与模板DNA的启动序列结合而启动转录。 一、原核生物转录酶及相关因子 （一）原核生物RNA聚合酶 大肠杆菌RNA聚合酶的组成分析 （二）原核生物转录相关因子（转录终止相关因子） ρ因子 是由相同亚基组成的六聚体蛋白质，亚基分子量46kD。 能结合RNA，对poly C的结合力最强。 具有ATP酶活性和解链酶活性。 二、原核生物转录过程 转录的起始（模板识别、转录起始） 转录的延伸 转录的终止 2.原核生物转录起始过程： 转录起始：全酶与模板的DNA接触，生成非专一的，不稳定的复合物在模板上移动。 起始识别：全酶与-35序列结合，产生封闭的酶-启动子二元复合物。 全酶紧密地结合在-10序列处，DNA模板局部变性，形成开放的启动子二元复合物。（RNA聚合酶与启动子结合后造成约18bp的DNA解链） 在RNA聚合酶作用下发生第一次聚合反应，形成转录起始复合物（全酶-DNA-pppGpN-OH） σ因子从全酶中解离下来，聚合酶转变为延长构型。酶分子与启动子结合力下降，延伸阶段开始。 RNA链的延伸：转录空泡(transcription bubble) 转录终止指RNA聚合酶在DNA模板上停顿下来不再前进，转录产物RNA链从转录复合物上脱落下来。 依据是否需要蛋白质因子的参与，原核生物转录终止分为： 依赖?因子的转录终止 非依赖?因子的转录终止 第二节 真核生物转录 （一） 真核生物RNA聚合酶 （二） 真核生物转录相关因子 转录因子 能直接、间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋白质，现已发现数百种，统称为反式作用因子(trans-acting factors)。 反式作用因子中，直接或间接结合RNA聚合酶的，则称为转录因子(transcriptional factors, TF)。 真核生物RNA聚合酶不与DNA分子直接结合，而需依靠众多的转录因子，形成转录起始复合物（pre-initiation complex，PIC)。 根据转录因子的作用特点可分为二类 第一类为基本转录因子，它们与RNA聚合酶Ⅱ共同组成转录起始复合物，转录才能在正确的位置开始。TFⅡD,TFⅡA，TFⅡF，TFⅡE，TFⅡH等，它们在转录起始复合物组装的不同阶段起作用。 第二类转录因子为特异转录因子（组织细胞特异性转录因子），这些TF是在特异的组织细胞或是受到一些类固醇激素，生长因子或其它刺激后，开始表达某些特异蛋白质分子时，才需要的一类转录因子。 RNA聚合酶II与启动子的结合、启动转录需要多种蛋白质因子的协同作用。通常包括：可诱导因子或上游因子，与增强子或启动子上游元件的结合；通用转录因子在启动子处的组装；辅激活因子和/或中介子在通用转录因子/RNA聚合酶II复合物与可诱导因子、上游因子之间的辅助和中介作用。因子和因子之间互相辨认、结合，以准确地控制基因是否转录、何时转录。 为了保证转录的准确性，不同基因需不同转录因子。 拼板理论(piecing theory) ：少数几个反式作用因子（主要是可诱导因子和上游因子）之间互相作用，再与基本转录因子、RNA聚合酶搭配而有针对性地结合、转录相应的基因。可诱导因子和上游因子常常通过辅激活因子或中介子与基本转录因子、RNA聚合酶结合，但有时也可直接与基本转录因子、RNA聚合酶结合。 其他因子：上游因子——与启动子上游元件结合，协助调节转录效率 真核生物RNA-pol不与DNA分子直接结合，而需依靠众多的转录因子，形成转录起始复合物(pre-initiation complex, PIC) 。真核生物的转录终止过程也与原核生物不相同。 起始：真核生物RNA-pol不与DNA分子直接结合，而需依靠众多的转录因子。转录起始复合物(PIC)的组装。 延长：类似原核生物。（核小体移位和解聚） 终止：与转录后修饰有关，转录终止修饰点切断加尾。 真核生物转录生成的RNA分子是初级RNA转录物(primary RNA transcript)，几乎所有的初级RNA转录物都要经过加工，才能成为具有功能的成熟的RNA。 加工主要在细胞核中进行。 2. mRNA 5端 “帽子”和3端的poly A 5端存在“帽子”结构：7-甲基鸟嘌呤-三磷酸核苷 3端的poly A结构 帽子结构功能： 能被核糖体小亚基识别，促使mRNA和核糖体的结合； m7Gppp结构能有效地封闭mRNA 5末端，以保护mRNA免受5核酸外切酶的降解，增强mRNA的稳定。 核内的hnRNA也有帽子结构，因此加帽是在核内完成，并且先于mRNA的剪接过程。 前体mRNA在3端