硅胶柱色谱层析杨列超剖析.pptxVIP

硅胶柱色谱层析技术 2012级药本一班杨列超 目录 一、柱层析原理 1、柱层析技术(chromatography) 又称柱色谱技术，主要原理是根据样品 混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同，经多次反复分配将组分分离开来。 2、柱层析操作时，先在圆柱管中先填充不溶性基质，形成一个固定相。将样品加到柱子上，用特殊溶剂洗脱，溶剂组成流动相。在样品从柱子上洗脱下来的过程中，根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同，经多次反复分配将组分分离。 常用溶剂的极性 常用溶剂的极性顺序：石油醚＜环己烷/己烷＜苯＜乙醚＜氯仿＜乙酸乙酯＜正丁醇＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水 极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统 极性较大的用甲醇：氯仿系统 极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统 拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸 二、柱层析装柱方法 1、操作要点：装柱前柱底要垫一层脱脂棉以防吸附剂外漏。 装柱子（添硅胶）时，有两种方法：即湿法装柱和干法装柱，二者各有优劣。不论干法还是湿法，硅胶（固定相）的上表面一定要平整，并且硅胶（固定相）的高度一般为15cm左右，太短了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。 （1）湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压用淋洗剂 “走柱子”，本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气 泡。 （2）干法装柱则是直接