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“备”则“倍” 有准备、有规划的人生更精彩! ①第1组:_________________________________________; ②第2组:_________________________________________。 (3)PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶,下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能,这是因为_________________ ___________________________________。 (4)用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ单独或联合切割同一种质粒,得到的DNA片段长度如下图(1 kb即1 000个碱基对),请画出质粒上EcoRⅤ、MboⅠ的切割位点。 【规范答题】(1)生物术语规范:碱基互补配对、DNA聚合酶、脱氧核苷酸、双链DNA。 (2)解答规范:第(1)小题要结合DNA的半保留复制进行解答。第(2)小题涉及到引物的设计和作用,要明确引物的作用是与模板链(DNA单链)的3′端的部分碱基发生碱基互补配对,之后单个脱氧核苷酸才能与模板链后面的碱基连续进行碱基配对;设计引物时,要注意引物之间、单个引物内不能发生碱基互补配对,否则会影响引物与模板链上的碱基互补配对,从而不能发挥引物的作用。 【解析】解答本题首先要明确两点:①PCR一般要经历三十多次循环,每次循环都包括变性、复性(退火)、延伸三步。②两个引物之间的固定长度的DNA序列呈指数扩增。然后结合问题作答。 (1)①从理论上推测,第四轮循环产物中含有引物A的 DNA片段所占的比例为15/16。②在第三轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。 (2)某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理,原因是:①引物Ⅰ和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效。②引物Ⅰ′自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效。 (3)DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上。 (4)由图可知,单独用限制酶EcoRⅤ切割质粒,形成一个片段,说明在质粒上只有一个EcoRⅤ切割位点;当用限制酶MboⅠ单独切割质粒时,形成两个片段,说明在质粒上有两个MboⅠ切割位点;当两者联合切割同一质粒时,形成三个片段,说明两种限制酶的切割位点不同,且EcoRⅤ酶切割位点距MboⅠ的两个酶切位点是5.5 kb 和6 kb。 满分答案:(1)①15/16 ②三 (2)①引物Ⅰ和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效 ②引物Ⅰ′自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效 (3)DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上 (4)见图 1.(2012·盐城一模)下列有关酶的应用的叙述正确的是 ( ) A.酶对重金属盐不敏感,但对低温、强酸、强碱非常敏感 B.加酶洗衣粉因为添加了酶制剂,比普通洗衣粉更易污染环境 C.固定化酶可以反复利用,但反应物与酶接触受影响而会降低反应效率 D.酶的催化功能很强,但只能在生物体内发挥作用 【解析】选C。酶对重金属、高温、强酸、强碱非常敏感。加酶洗衣粉易分解,不易污染环境。固定化酶因其外有物质包裹,酶与反应物接触受影响。酶既可在体内发挥作用,也可在体外发挥作用。 2.(2011·江苏高考)下列有关植物组织培养的叙述,正确的是( ) A.愈伤组织是一团有特定结构和功能的薄壁细胞 B.二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后得到稳定遗传的植株 C.用人工薄膜将胚状体、愈伤组织等分别包装可制成人工种子 D.植物耐盐突变体可通过添加适量NaCl的培养基培养筛选而获得 【解析】选D。愈伤组织源自外植体的脱分化,其细胞无特定形态、结构和功能;花粉离体培养得到的只是单倍体植株,B项描述缺少了秋水仙素处理的环节;人工种子内包装的是胚状体,而非愈伤组织;耐盐突变体的筛选,需用含一定盐分的选择培养基进行培养获得。 3.(2011·广东高考)以下关于猪血红蛋白提纯的描述,不正确的是( ) A.洗涤红细胞时,使用生理盐水可防止红细胞破裂 B.猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核,提纯时杂蛋白较少 C.血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测 D.在凝胶色谱法分离过程中,血红蛋白比相对分子质量较小的杂蛋白移动慢 【解析】选D。D项考查凝胶色谱法分离蛋白质的原理,相对分子质量越大的通过凝胶色谱柱的速度越快,故D错误。A正确,洗涤的目的是去除杂蛋白以利于后续步骤的分离纯化,洗涤时加入生理盐水,缓慢搅拌10 min,低速短时间离心,重复洗涤三次,直至上清液不再呈现黄色,表明红细胞已洗涤干净。B正确,哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核与众多的细胞器,提 纯时杂蛋白较少。C正确,血红蛋白是有色蛋白,因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液(如果操作都正确,能清楚的看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄
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