高效液相色谱法原理与应用剖析.ppt

高效液相色谱法原理与应用 第1章 色谱基本原理 一、色谱法概述 色谱法的定义与特点 色谱法的分离原理 色谱法的特点 色谱法的分类 1.色谱法的定义 ???? 1903年3月21日,俄国植物化学家茨维特(Twseet)在华沙的自然科学学会生物学会议上,提出了“一种新型吸附现象及其在生化分析上的应用”论文。 ???? 他首先将植物的石油醚提取物放入装有碳酸钙的玻璃 管的上端，然后用石油醚淋洗，结果在玻璃管中不同的色素按吸附顺序呈现出不同的色带。1906年，发表另一篇论文将其色带命名为“色谱”。 1.色谱法的定义 色谱分离效果图 色谱法是一种分离方法。 它的特点是：有两相，一是固定相，一是流动相，两相作相向运动。 Chromatography 将色谱法用于分析中，则称为色谱分析。 色谱分析是一种分离、分析法。 2、色谱法分离原理 当流动相中所携带的混合物流过固定相时，就会和固定相发生作用(力的作用)。由于混合物中各组分在性质和结构上有差异，与固定相发生作用的大小也有差异。因此在同一推动力作用下，不同组分在固定相中的滞留时间有长有短，从而按先后不同的次序从固定相中流出。 3、色谱法的分类 按流动相状态的不同，可分为 什么是气相色谱法？ 以气体为流动相的色谱法 Gas Chromatogaphy，简称GC 适合分离分析易汽化（在- 190℃-500℃范围内有0.2-10mmHg的蒸气压的）稳定、不易分解的样品，特别适合用于同系物、同分异构体的分离。 什么是液相色谱法？ 以液体为流动相的色谱法 Liquid Chromatogaphy，简称LC 适合分离分析高沸点、热不稳定、离子型的样品。 按固定相使用的形式液相色谱法又可分为： 柱色谱（Column Chromatography） 将固定相装在色谱柱内 纸色谱（Paper Chromatography） 用滤纸做固定相或固定相载体的色谱 薄层色谱（Thin Lay Chromatography） 固定相均匀涂在玻璃板或塑料板上 液相色谱图相关术语 ?? 色谱峰－ Peak ???? 色谱柱流出组分通过检测器时产生的响应信号的微分曲线 峰底 － Peak Base ???? 峰的起点与终点之间连接的直线 峰高 － Peak Height ???? 峰最大值到峰底的距离 峰宽 － Peak Width ???? 在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离 ??半（高）峰宽 － Peak Width at Half Height ???? 通过峰高的中点作平行于峰底的直线，其与峰两侧相交两点之间的距离 液相色谱图相关术语 峰面积－ Peak Area ???? 峰与峰底之间的面积,又称响应值 标准偏差； σ － Standard Error ???? 0.607倍峰高处所对应峰宽的一半 拖尾峰－ Tailing Peak ???? 后沿较前沿平缓的不对称峰 前伸峰－ Leading Peak ???? 前沿较后沿平缓的不对称峰 鬼峰 － Ghost Peak ???? 并非由试样所产生的峰；亦称假峰 液相色谱图相关术语 ???? 基线－ Baseline ???? 在正常操作条件下，仅由流动相所产生的响应信号 的曲线 基线飘移 － Baseline Drift ???? 基线随时间定向的缓慢变化 基线噪声； N －－Baseline Noise ???? 由各种因素所引起的基线波动 谱带扩展 － Band Broadening ???? 由于纵向扩散,传质阻力等因素的影响,使组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度增加的现象 液相色谱图相关术语 ???? 死时间， to － Dead time ???? 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需的时间 保留时间，tr－Retention time ???? 组分从进样到出现峰最大值所需的时间 死体积，Vo－Dead volume ???? 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需的流动相体积 保留体积，Vr－Retention volume ???? 组分从进样到出现峰最大值所需的流动相体积 评价液相色谱方法的标准 容量因子（k）对分离度（R）的影响 梯度洗脱 梯度洗脱即程序控制流动相的组成，使在整个分离过程中，溶剂强度按照特定的变化规律增加。 优点：分离复杂混合物，使所有组分都处在最佳的k值范围内。 缺点：检测器的使用受到限制，分析结果的重复性取决于流速的稳