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2011级细胞生物学实验讲义 实验一　　细胞膜通透性观察 一、实验目的 1.了解细胞膜对物质通透性的一般规律。2.了解溶血现象及其发生机制。 细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障。它是一种半透膜，可选择性控制物质进出细胞。0.5-1.0nm，并非所有的物质都能通过。各种物质出入细胞的方式是不同的，水是生物界最普遍的溶剂，水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散，这种现象就是渗透。渗透作用是细胞膜的主要功能之一。将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到细胞内，可使细胞胀破，血红蛋白释放到介质中，由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液，这种现象称为溶血。将红细胞放在某些等渗盐溶液中，由于红细胞膜对各种溶质的通透性不同，膜两侧的渗透压平衡会发生改变，也会发生溶血现象。因此，发生溶血现象所需时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。本实验选用红细胞作为细胞膜透性的实验材料，将其放入不同的介质溶液中，观察红细胞的变化。 1、仪器、用具：小烧杯、试管、试管架、刻度吸管、秒表。 2、材料：含适量阿氏液的鸡血或兔血。 3、试剂： (1)各种待测溶液：1mol/L乙二醇水溶液、1mol/L丙三醇水溶液、1mol/L葡萄糖水溶液、3mol/L甲醇、3mol/L乙醇、3mol/L丙醇、1/8mol/L、1/10mol/L、1/12mol/Lmol/L葡萄糖水溶液、1/8mol/L、 1/12mol/L、1/16mol/LNaCl溶液。 (2)阿氏液（Alsever液）,配方如下： 枸橼酸钠(Na9C6H5O7.2H2O)……………………………….0.80g 枸橼酸（C6H 6O7.H2O）…………………………………0.325g 葡萄糖…………………………………………………… 2.05g 氯化钠…………………………………………………….0.42g H2O ………………………………………加至100.00ml 混匀溶解后，114.3℃高压灭菌，10min备用。阿氏液即含有枸橼酸钠抗凝剂，又含有细胞生存的营养，所以它即可做细胞的抗凝剂，又可做细胞的保存液。阿氏液和采血量为1：1，一般在4℃下红细胞可保存2周其活性和特性不变。 三、方法与步骤 取1支试管，按附表中所示测试溶液，分别取样各ml，作出标记后，各管均加入红细胞悬液2 滴，混匀后静置于温室中，观察各支试管中发生溶血的时间及其变化。观察结果1. 试管内液体分两层：上层浅黄色透明，下层红色不透明为不溶血（－），镜检红细胞完好呈双凹盘状。2. 如果试管内液体混浊，上层带红色者，称不完全溶血（＋或＋＋），镜检有部分红细胞呈碎片。3. 如果试管内液体变红而透明者，称完全溶血（＋＋＋），镜检发现细胞全部呈碎片。 1、试管中有红细胞和测试溶液时，不应强力摇晃，以免造成人为的红细胞破裂。 2红细胞和测试溶液混匀后静置于温室中 1 1mol/L乙二醇水溶液 2 1mol/L丙三醇水溶液 3 1mol/L葡萄糖水溶液 4 3mol/L甲醇 5 3mol/L乙醇 6 3mol/L丙醇 7 1/8mol/L葡萄糖水溶液 8 1/10mol/L葡萄糖水溶液 9 1/12mol/L葡萄糖水溶液 10 1/8mol/LNaCl溶液 11 1/12mol/LNaCl溶液 12 1/16mol/LNaCl溶液 目测法判断标准：快速溶血：＋＋＋；慢速溶血：＋＋或＋；不溶血：－ 为什么所有带电荷的分子（离子），不管多小，都不能自由扩散？ 八、课后习题 概念题 渗透作用: 水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散，这种现象就是渗透 将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到细胞内，可使细胞胀破，血红蛋白释放到介质中，由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液，这种现象称为溶血。将红细胞放在渗盐溶液中将红细胞放在低渗盐溶液中， 一、实验目的 1、观察动植物活细胞内线粒体、液泡系的形态数量与分布； 2、学习一些细胞器的超活染色技术。 二、实验原理 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色，但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。 根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染二类。体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶体固定，堆积在细胞内的某些特殊结构里，达到易