11章荧光分析法.pptVIP

* 第十一章荧光分析法 光致发光：在些物质受到光照射时，除吸收某种波长的光，还会发射出比原来所吸收光的波长的更光。这种现象称为光致发光。最常见的就是荧光和磷光。 荧光是物质分子接受光子能量被激发后，从激发态的最低振动能级返回基态时发射出的光。荧光分析法：是根据物质的荧光谱线位置及其强度进行物质鉴定和含量测定的方法。 紫外可见荧光、红外荧光和X射线荧光 分为分子荧光和原子荧光 第一节 荧光分析法的基本原理 一、分子荧光 （一）分子荧光的产生 1、分子的电子能级与激发过程 电子能级的多重性表示M=2s+1 s=0，分子的多重性M=1，此时分子所处的电子能态称为单重态。用S表示。 s=1，分子的多重性M=3，此时分子所处的电子能态称为激发三重态。用T表示。 2、荧光磷光的产生 1) 振动弛豫：处于激发态各振动能级的分子通过与溶剂分子的碰撞而将振动能量传递给溶剂分子，其电子返回到同一电子激发态的最低振动能级的过程。 2) 内部能量转换：是当两个电子激发态之间的能量相差较小以致其振动能级有重叠时，受激分子常由高电子能级以无辐射方式转移至低电子能级的过程。 3) 荧光发射：分子由第一激发单重态的最低振动能级，以辐射形式发射光量子而返回至基态的任一振动能级上，这时发射的光量子称为荧光。 2、荧光磷光的产生 5) 体系间跨越：是处于激发态分子的电子发生自旋反转而使分子的多重性发生变化的过程。 4) 外部能量转换：是溶液中的激发态分子与溶剂分子或与其它溶质分子之间相互碰撞而失去能量，并以热能的形式释放能量的过程。 6)磷光发射：经过体系间跨越的分子再通过振动弛豫降至激发三重态的最低振动能级，分子在激发三重态的最低振动能级可以存活一段时间，然后返回基态的各个振动能级而发出光辐射， 这种光辐射称为磷光。 2、荧光磷光的产生 （二）荧光的激发光谱和发射光谱 激发光谱：表示不同激发波长的辐射引起物质发射某一波长荧光的相对效率。记录荧光强度（F）对激发波长（λex）的关系曲线，即荧光光谱。 荧光光谱（荧光发射光谱）：表示在所发射的荧光中各种波长组分的相对强度。记录荧光强度（F）对发射波长（λem）的关系曲线，即荧光光谱。 荧光光谱具有如下特征： 1、斯托克斯位移：是荧光发射波长总是大于激发光波长的现象。 2、荧光光谱的形状与激发波长无关： 3、荧光光谱与激发光谱的镜像关系： 荧光光谱与激发光谱的镜像关系： （一）荧光寿命和荧光效率 荧光效率：又称荧光量子产率，是指激发态分子发射荧光的光子数与基态分子吸收激发光的光子数之比，常用φ表示。 二、荧光与分子结构的关系 荧光寿命：当除去激发光源后，分子的荧光强度降低到最大荧光强度的1/e所需的时间。 φ= 发射荧光的光子数 吸收激发光的光子数 （二）有机化合物分子结构与荧光的关系 1、长共轭结构 能够发射荧光的物质同时具备两个条件：即在强的紫外吸收和一定的荧光效率。 2、分子的刚性 3、取代基 （三）荧光试剂 三、影响荧光强度的外部因素 1、温度 2、溶剂 3、酸度 4、荧光熄灭剂：荧光熄灭又称荧光淬灭，是指荧光物质分子与溶剂分子或其它溶质分子相互作用引起荧光强度降低的现象。引起荧光熄灭的物质称为荧光熄灭剂。 （1）因荧光物质的分子与熄灭剂分子碰撞而损失能量。 引起荧光熄灭的原因如下： （2）荧光物质的分子与熄灭剂分子作用生成了本身不发光的配位位化合物。 （3）溶解氧的存在，使荧光物质氧化，或是由于氧分子的顺磁性。，促进了体系间跨越，使激发单重态的荧光分子转变至三重态。 （4）浓度大发生自熄灭现象。 荧光熄灭法： 利用荧光物质荧光强度的减弱和荧光熄灭剂的浓度呈线性关系，测定荧光熄灭剂的含量的方法。 拉曼光： 5、散射光：当一束平行光照射在液体样品上时，大部分光线透过样品，小部分由于光子与物质分子相碰撞，使光子的运动方向发生改变而向不同角度散射，这种光称为散射光。 瑞利光： 三、影响荧光强度的外部因素 第二节荧光定量分析方法 对低浓度溶液，由Beer定律，可以得到如下公式： F=Kc(荧光定量分析法的依据) 一、溶液荧光强度与物质浓度的关系 二、荧光定量分析方法 1、工作曲线法 2、比例法（对照法） 3、联立方程式法：用于多组分混合物的荧光分析（同紫外法似） 第三节荧光分光光度计和其他荧光分析技术 主要部件： 由激发光源、 激发单色器（置于样品前）和发射单色器（置于样品后）、样品