第四胚胎剖析.docVIP

第四章 胚胎，花药和花粉培养 胚胎培养：是指将种胚及其相关器官或组织（子房、胚珠、胚乳）进行离体培养，使其发育成完整植株的技术。 包括幼胚培养、成熟胚培养、胚珠培养、子房培养、胚乳培养等 背景 Hanning and Laibach 建立了合子胚培养技术 20世纪20年代建立了幼胚培养和胚胎拯救技术 1934 清华的李继侗和沈同发现银杏gingko胚乳提取物可刺激离体胚生长 1940 La Rue 最先培养胚乳 1941 Van Overbeek 发现椰乳对幼胚发育的促进作用 之后胚胎培养技术逐渐成熟， 1970 Bhojwani 白花寄生获得胚乳植株 第一节 胚胎培养 一 胚培养 1. 胚培养的用途 1)克服远缘杂种的不育性: 在高等植物的种间和属间杂交后代胚败育，胚发育不全而不能正常萌发，因而得不到杂种种子，用胚胎培养和试管受精技术就可以解决这些问题。 2) 克服了种子休眠和种子自交不育性，使胚发育不全的植物获得后代。如在种子接近成熟时，把胚分离出来进行培养，就能生长发育成正常植物。 3）胚的拯救： 远交的种胚常因胚乳发育不良而败育，败育前培养可得植株；早熟、生活力低的种子亦然。 4) 缩短育种年限 在杂交育种中，应用胚培养技术可以缩短育种周期1～2年。 5）获得单倍体植株 远缘杂交结合胚培养，是获得单倍体的有效途径之一。 6）诱导胚状体 用幼胚或其他胚胎组织进行培养，可获得大量胚性愈伤和胚状体。 7）胚胎发育研究。 8）种子生活力的快速测定：未后熟和经后熟的种胚在离体培养下萌发速率一致。用于休眠期长的植物。 2、 内容： 包括胚胎发育不同时期的胚，一般分为未成熟胚（子叶期前）和成熟胚（子叶期后）的培养。 成熟胚培养较易，在含大量元素和糖的培养基上就能培养成苗。 未成熟胚培养较难，需提供必需的营养和条件。 3. 胚培养的技术 3.1 成熟胚 方法： 种子→表面消毒→无菌水冲洗→剥胚→接种于简单培养基→培养。 培养条件： 具休眠习性者，4℃ 处理后转入常温培养25度； 12 h左右光照。 3.2 幼 胚 方法： 胚珠→表面消毒→解剖镜下剥胚（带胚柄）→接种→培养。 培养基：成熟胚对培养基要求不高，而幼胚要求较高，MS，B5，Nitsch培养基，其他适于未成熟胚和幼胚培养。幼胚需要较高的蔗糖浓度，以提供较高的渗透压，但由于幼胚在自然条件下赖以生存的是无定形的液体胚乳，并具有较高的渗透压，所以人工培养基中要创造高渗透压的条件，使它可以调节胚的生长，阻止可能渗透压的影响，并能抑制中早熟萌发中的细胞延长，以及抑制胚的萌发，避免把细胞的伸长状态转化为分裂状态。 Nitch、MS、B5 培养基； 胚乳看护培养：培养基中加同种/相近种的胚乳。 高浓度蔗糖（8~12%）：模拟胚乳高渗环境； 适量的激素：GA3、 IAA等，刺激幼胚发育。 温度：对于大多数植物的胚来说，在25～30℃为宜。光暗交替培养较为有利。 4. 离体胚发育途径 1) 一种是继续进行正常的胚胎发育，维持“胚性生长”； 2）另一种是在培养后迅速萌发成幼苗，而不继续进行胚性生长，通常称为 “早熟萌发”；指幼胚在离体培养条件下，越过正常胚胎发育阶段，在未达到生理和形态成熟的情况下，萌发长成幼苗的现象。越过某一发育时期，如子叶形期而提早萌发，苗瘦弱，常死亡。 措施：增加培养基中糖和无机盐的浓度，提高培养基渗透压。添加 ABA；高温、强光照下培养。 3）第三种是在很多情况下，胚在培养基中能发生细胞增殖形成愈伤组织，并由此再分化形成多个胚状体或芽原基。特别是进行生长调节时，就更为如此。 培养基成分不适宜，如激素浓度较高，幼胚→（较多胚性）愈伤→再生植株。 二、胚珠培养 将受精或未受精胚珠进行离体培养。 1. 胚珠培养的用途 1）成熟胚小或幼胚培养难成活时，用受精胚珠培养。 1958，Maheshwar，授粉5d 的罂粟胚珠（合子或2细胞原胚）培养得到种子。 2）未受精胚珠培养可诱发大孢子发育成单倍体植株，克服花粉单倍体植株白化苗问题。1980开始，非洲菊、烟草、甜菜、柑橘等成功。 3）未受精胚珠培养可为离体受精提供雌配子体。 2. 胚珠培养技术 花蕾→取子房→灭菌→无菌水冲洗→ 取胚珠→接种→培养。 有时，连同胎座或用子房进行培养。 3. 影响胚珠培养的主要因素 1）胚囊发育时期：是关键，水稻未受精胚珠培养单核~四核期较好。 2）胎座和子房：提供营养和激素。 3）培养基：常用Nistch，MS、N6、B5也可。 三、胚乳（endosperm）培养 胚乳：被子植物双受精产物，三倍体；大多数植物随胚的发育，胚乳常被耗尽（豆科、葫芦科）。 在胚乳培养中，除少数寄生或半寄生植物可以直接从胚乳分化器官以外，绝大多数被子植物的胚乳，无论成熟还是未成熟，都要先经历愈伤组织阶段，然后才能