第十八氨基酸已剖析.pptVIP

第十八章 氨基酸 概述 第一节 氨基酸的生产 第二节 赖氨酸发酵 第三节 苏氨酸发酵 第四节 异亮氨酸、亮氨酸发酵 概 述 氨基酸是构成蛋白成分。 第一个用发酵法生产的氨基酸是谷氨酸。目前世界上可用发酵法生产的氨基酸有20多种。 氨基酸的用途 1.食品工业： 强化食品(赖氨酸，苏氨酸，色氨酸于小麦中) 增鲜剂：谷氨酸单钠和天冬氨酸 苯丙氨酸与天冬氨酸可用于制造低热量二肽甜味剂(α-天冬酰苯丙氨酸甲酯)，此产品1981年获FDA批准，现在每年产量已达数万吨。 2.饲料工业： 甲硫氨酸等必需氨基酸可用于制造动物饲料。 必需氨基酸的木桶模式图 3.医药工业： 多种复合氨基酸制剂可通过输液治疗营养或代谢失调。 苯丙氨酸与氮芥子气合成的苯丙氨酸氮芥子气对骨髓肿瘤治疗有效，且副作用低。 4.化学工业：谷氨基钠作洗涤剂，丙氨酸制造丙氨酸纤维。 生产氨基酸的大国为日本和德国。 日本的味之素、协和发酵及德国的德固沙是世界氨基酸生产的三巨头。它们能生产高品质的氨基酸，可直接用于输液制剂的生产。 日本在美国、法国等建立了合资的氨基酸生产厂家，生产氨基酸和天冬甜精等衍生物。 国内生产氨基酸的厂家主要是天津氨基酸公司,湖北八峰氨基酸公司，但目前无论生产规模及产品质量还难于与国外抗衡。 在80年代中后期，我国从日本的味之素、协和发酵以技贸合作的方式引进输液制剂的制造技术和仿造产品，1991年销售量为二千万瓶，1996年达六千万瓶，主要厂家有无锡华瑞，北京费森尤斯，昆明康普莱特，但生产原料都依赖进口。 据专家估计，到2010年，世界氨基酸产值可达50亿美元，占生物技术市场的8%，国内的氨基酸产值可达40亿元，占全国发酵产业总产值的12%。 第一节 氨基酸的生产 一、氨基酸的生产方法 （一）提取法：生产氨基酸最早采用的生产方法。将蛋白质原料酸水解，然后从水解液中抽提出氨基酸。 （二）直接发酵法：利用微生物的作用直接将粮食原料经过发酵生产氨基酸。野生菌株发酵、营养缺陷型突变发酵、抗氨基酸结构类似物突变株发酵、抗氨基酸结构类似物突变株的营养缺陷型菌株发酵和营养缺陷型回复突变株发酵。 （三）添加前体法：利用微生物转化相应的氨基酸的前体，成为相应的氨基酸。如：利用嗜甘油棒杆菌将甘氨酸转化为丝氨酸。 （四）酶法：利用微生物产生的酶来制造氨基酸。如赖氨酸、色氨酸等可用此法。 （五）合成法：用化学合成的方法制造氨基酸。 DL-蛋氨酸、丙氨酸、甘氨酸、苯丙氨酸。 氨基酸生产方法的比较 二、氨基酸产生菌的选育 氨基酸是细胞组分，受到严格的代谢调节控制。 想让菌种积累大量的某一个氨基酸，必须打破微生物对该氨基酸的代谢调控。如选育营养缺陷型或氨基酸类似物抗性突变，可以减弱或消除氨基酸终产物阻遏。 （一）氨基酸产生菌的分离 氨基酸生产菌的要求：代谢途径比较清楚，代谢途径比较简单 1.产生菌的来源：采样分离；一般为细菌（棒杆菌属，短杆菌属、节杆菌属或小杆菌属的棒型细菌）；分离时要抑制真菌（50μg/mL匹马菌素） 2.分离方法：平板分离 3.筛选方法 关键： ①设计一种适合氨基酸产生的生产培养基 根据其生物合成知识设计，如谷氨酸的生产需生物素；蛋氨酸的前体为β-甲基硫基-α-羟基丁酸等。 ②确定一种大规模筛选的氨基酸检测方法 氨基酸检测方法： A.平板培养+覆盖培养基（含氨基酸鉴定菌） B.可逆抑制测定法 例：L-苯丙氨酸产生菌的筛选 C.液体培养基中氨基酸产生菌的检测 a.过滤除菌发酵液（含该菌产生的AA）+ 氨基酸测定培养基（含氨基酸鉴定菌——该AA缺陷 ）→37℃，16-23h，测定细胞密度或浊度。 b.发酵培养基（不接种产生菌）+ 已知浓度的特定氨基酸样品+鉴定菌→37℃，16-23h，测定细胞密度或浊度。 （二）氨基酸营养缺陷型突变株的选育方案 1.配制以下培养基 2.诱变与营养缺陷型突变株的分离 3.营养要求的测定 1.配制以下培养基 ①基本培养基(MM)：能满足野生型菌株正常生长的培养基； ②完全培养基(CM)：能满足各种营养缺陷型生长的培养基，如牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基等； ③补充培养基(SM)：在基本培养基中加入相应的营养成分，以满足相应营养缺陷型菌株生长的合成培养基。 2.诱变与营养缺陷型突变株的分离 诱变：物理诱变、化学诱变 ↓ 淘汰野生型：抗生素（青霉素）法 ↓ 检出缺陷型：影印法、点种法、夹层法等 检出原理：利用固体培养基，缺陷型在CM上生长良好，在MM上则不生长，而野生型都能生长。 3.营养要求的测定 利用补充培养基(SM)（在基本培养基中加入相应的氨基酸成分）。 （三）氨基酸结构类似物抗性突变株的选育 1.目的：解除氨基酸的反馈抑制和阻遏 2.突变株形成原因：参看课本P356 3.氨基酸结构类似物 （四）