第七抗原抗体反应及应用剖析.pptVIP

第七章 抗原抗体反应及应用 第一节 抗体的制备 多抗（ployclonal antibody） 单抗（monoclonal atibody） 抗体库（antibody library） 基因工程抗体（engineering antibody） 催化抗体（catalytic antibody or abozyme） 抗血清：含有特异性抗体的动物血清。 一、抗血清的制备 1、免疫动物 抗原 — 佐剂 — 免疫动物 2、抗血清的纯化和保存 采血 — 抗血清的纯化—保存 3、抗血清的特性鉴定 滴度（titer） —亲和（合）力— 特异性 二、抗体的特性 1 抗原-抗体反应 作用力 抗原抗体作用力 2 抗体的特性测定 滴度（Titer）是指在给定条件下，结合一定量抗原所需的最大的抗血清稀释倍数。（因方法不同有差异） 特异性（Specificity） 特异性检测/竞争性检测 亲和力（Affinity）和亲合力（Avidity） 亲和力是单个抗原表位与单个抗体结合位点之间的作用力，反映抗体与抗原表位特异性结合强弱的量化指标。 Calculation of Affinity 亲合力（Avidity）p156 多价抗原与抗体结合强度的总体评价 ，反映抗原抗体结合的总体效果。（提高浓度改善抗原抗体亲和性） 3 影响抗原-抗体反应的因素 亲和力 亲合力 抗原抗体比例 第二节 抗原抗体反应原理 抗原抗体反应是非共价的特异性可逆反应。 体外免疫检测的原理。 一、抗原抗体反应的热力学与动力学 1 溶液中抗原抗体反应的化学平衡 Ag+Ab=Ag-Ab Kα = [SL] /[S][L]= K+/K- p152 Kα : 平衡常数或内在亲和力。Kd:解离常数 达到反应平衡需要的时间较长，但反应进行90%很容易。 Kα相同并不能说明K+和K-的大小。 K +大时，有利于结合，抗原抗体结合稳定 K-大时， 达到平衡点快，结合不稳定 。 前者用于标记，后者用于亲和层析。 抗体结合抗原的特异性 同源抗原（强） 异源抗原（弱） 变态抗体（强） 抗原末端或表面基团具有免疫优势 三、抗体与大分子多价抗原的反应 1 多抗原决定簇-大分子抗原特征 抗原决定簇（表位）-多价抗原-表位重叠 半抗原为单抗原决定簇 结合在固体上具有多抗原决定簇的效果 与液体中的半抗原反应不同 2 抗原抗体的亲和力和亲合力 亲和力(affinity)单价抗原与抗体结合的强弱 亲合力(avidity) 多价抗原与抗体结合强度的总体评价 3 抗体与多价抗原结合的浓度带现象 抗体与单价抗原结合往往形成可溶性复合物 抗体与多价抗原可以形成沉淀（条件） 抗原抗体反应时 前带区（抗体过量，沉淀少） 等带区（抗体抗原适量，大量沉淀） 后带区（抗原过量，沉淀少） 初级反应（未出现沉淀） 次级反应（出现沉淀） 形成沉淀需要一定时间，另外温度、pH值、离子强度、补体等 沉淀的形成可以用网络理论解释 4 交叉反应 抗体与同源抗原反应，又与异源抗原结合就产生了交叉反应。同源抗原结合强，异源结合弱。 第三节 常见免疫分析方法 利用抗原抗体特异性反应特点，对其中之一进行定性定量分析的方法。 特异、灵敏、迅速特点。 一、免疫沉淀（immune precipitation) 前带区（抗体过量，沉淀少） 等带区（抗体抗原适量，大量沉淀） 后带区（抗原过量，沉淀少） 形成沉淀需要一定时间，另外温度、pH值、离子强度、补体等 1 溶液中的沉淀反应 环状沉淀试验 原理: 检测抗原 （2）双向免疫扩散： 免疫电泳 　血清免疫电泳　鉴定-特异图谱 　火箭免疫电泳 　对流免疫电泳 （1）免疫电泳 原理：电泳后双扩 (3)对流免疫电泳： 5. 免疫凝集反应(Agglutination Reactions) 抗体与颗粒抗原结合形成的可见聚集反应。 The interaction between antibody and a particulate antigen results in visible clumping called agglutination ABO血型系统特点： 间接凝集抑制试验:乳胶妊娠试验 将待测样品中的抗原与已知抗体作用后，再与相应抗原—乳胶颗粒混合。因没有游离抗体的存在，乳胶颗粒表面的抗原不能与抗体结合出现凝集现象