蛋白质的功能剖析.pptVIP

2. C末端的测定 常用羧基肽酶法 羧基肽酶专一地将肽链水解成片断，分别进行顺序分析。 第三步 肽链的局部水解 胰蛋白酶的作用原理 1. 酶解法 CNBr与Met反应测定Pr的一级结构 2. 化学法 层析鉴定就可N-端开始确定被测肽段的氨基酸排列顺序 第四步 肽段氨基酸顺序分析 一般采用 Edman降解法 弱碱条件 异硫氰酸苯酯 + N端α-氨基 苯氨基硫甲酰肽(PTC-肽） 酸性条件 环化 水解 苯乙内酰硫氨基酸(PTH-aa) 失去原N-端氨基酸的肽 剩下的肽可反复进行上述处理，依次生成各种PTH-aa， Edman降解法的示意图 　 一般常用多种方法使肽链断裂，并分析出各肽段中的氨基酸顺序。由于在不同部位断链，只要找出多套肽段的重叠部位，然后组合排列对比，即可推断肽段的排列顺序，从而得出完整肽链中氨基酸的顺序。 第五步 肽链一级结构的确定 则其氨基酸排列顺序为： 　Thr-Asn-Val-Lys-Ala-Trp-Gly-lys 如测一个九肽 测得N端氨基酸残基为Thr 又分别测得片断: Ala-Ala-Trp-Gly-Lys  Val-Lys-Ala-Ala-Trp Thr-Asn-Val-Lys 另外，亦可以通过基因中核苷酸顺序推测蛋白质的氨基酸顺序 一级结构测定 基本战略：片段重叠法＋氨基酸顺序直测法 要点：a.测定蛋白质的分子量及其氨基酸组分 b. 测定肽键的N－末端和C－末端 c. 应用两种或两种以上的肽键内切酶分别在多肽键的专一位点上断裂肽键；也可用溴化氰法专一性地断裂甲硫氨酸位点，从而得到一系列大小不等的肽段。 d. 分离提纯所产生的肽段，并分别测定它们的氨基酸顺序 e. 将这些肽段的顺序进行跨切口重叠，进行比较分析，推断出蛋白质分子的全部氨基酸序列。 蛋白质顺序测 定基本战略 将肽段顺序进行叠联以确定完整的顺序 将肽段分离并测出顺序 专一性裂解 末端氨基酸测定 二硫键拆开 纯蛋白质 五、蛋白质空间结构的测定 1. X射线晶体衍射法 X-衍射图代表射线穿过（蛋白质）晶体的一系列平行剖面的各原子的电子密度，然后再借助计算机绘制出三维的电子密度图。 2.二维磁共振技术 3. 蛋白质空间结构的预测 （1）根据分子力学、分子动力学、物理化学原理，从理论上计算推测蛋白质的空间结构 （2）从已知蛋白空间结构规律，从一级结构推测空间结构。 问答题和计算题 1、为什麽说蛋白质是生命活动最重要的物质基础？ 2、试比较Gly、Pro与其它常见氨基酸结构的异同，它们对多肽链二级结构的形成有何影响？ 3、试举例说明蛋白质结构与功能的关系（包括一级结构、高级结构与功能的关系）。 4、为什么说蛋白质水溶液是一种稳定的亲水胶体？ 5、什麽是蛋白质的变性？变性的机制是什麽？举例说明蛋白质变性在实践中的应用。 ? 名词解释 等电点（pI） 肽键和肽链 肽平面及二面角 一级结构 二级结构 三级结构 四级结构 超二级结构 结构域 蛋白质变性与复性 肽 1.5 蛋白质的理化性质及分离纯化 一、蛋白质的两性电离和等电点 对某一蛋白质而言，在某一pH下，当它所带正负电荷相等的时候，该溶液的pH就称为该蛋白质的等电点。 蛋白质的等电点的大小与蛋白质的氨基酸组成有关。 2、等电点 蛋白质是两性电解质。在溶液中的带电状况主要取决于溶液的pH值。 Pr COOH NH3+ Pr COO- NH3+ Pr COO- NH2 +OH- +H+ +OH- +H+ pH=pI pHpI pHpI 二、蛋白质的高分子性质 蛋白质溶液有许多高分子溶液的性质，如：扩散慢、易沉降、 粘度大、不能透过半透膜，在水溶液中可形成亲水的胶体。 ????蛋白质胶体溶液的稳定因素：水化膜、带电荷。当破坏这两个因素时，蛋白质中从溶液中析出而产生沉淀。 蛋白质分子颗粒大小1~100nm之间,属胶体颗粒范围， 蛋白质的胶体原因： 表面形成水化层 表面同种电荷的斥力 蛋白质的胶体性质 在溶液中能形成稳定的胶体 三、蛋白质的沉淀作用 ?当破坏了维持蛋白质胶体稳定的因素甚至蛋白质的构象时，蛋白质就会从溶液中析出，这种现象称为蛋白质的沉淀。 1. 盐析：在蛋白质的水溶液中，加入大量高浓度的强电解质盐如硫酸胺、氯化钠、