薄层色谱法剖析.pptxVIP

薄层色谱法;薄层色谱法（ Thin layer chromatography ，TLC）;薄层色谱法是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，也用于跟踪反应进程。 薄层色谱不需要特殊设备，操作简单，试样和展开剂用量少，展开速度快。特别适合于挥发性较小或较高温易发生变化的物质的分离。 薄层色谱经常被用于探索柱层色谱分离条件和监测柱层色谱过程 。 薄层色谱在药品食品检验、化工化学、临床医学、农药残留检测等领域得到广泛应用。 ;一、发展历史 1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一种天然药物。 1965年德国化学家出版了“薄层色谱法”一书，促进了这一技术的发展。 因TLC法设备简单，分析速度快，分离效率高，结果直观，很快被用作定性和半定量的方法。 70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年代以后发展了薄层色谱光密度扫描仪，各步操作实现了仪器化，并实现了计算机化。发展起来至今，仍被广泛采用。 ;二、基本原理;三、仪器与材料; 常见固定相种类： 硅胶—为使用最广泛的薄层材料 氧化铝—有碱性、中性、酸性 硅藻土—为化学中性吸附剂 纤维素—天然多糖类 聚酰胺—特殊类型有机薄层材料，对能形成氢键的物质;实验室应用最广泛的为硅胶薄层板。常用类别有： 硅胶H：不含石膏黏合剂 硅胶G：含煅石膏（硫酸钙）粘合剂 硅胶S：用5%淀粉作黏合剂 硅胶：用羧甲基纤维素（CMC）作黏合剂 硅胶GF254：含煅石膏和一种无机荧光剂，即锰激活的硅酸锌，在254nm紫外光下呈强烈黄绿色荧光背景。 ;②点样器 一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。微升毛细管常用规格有0.5ul，1.0ul、2.0ul、3.0ul、4.0ul、5.0ul及10ul等。对点样用的微升毛细管的要求是标示容量准确，管端平整光滑，管壁洁净，液流通畅，无堵塞，无污染，也可选用色谱用微量注射器（应选用针尖平头适合薄层点样的）。;③展开容器 薄层色谱展开方式按几何类型份为 ： 线型、环型和向心型。;流动相（展开剂） 要求： ①对的所需成分有良好的溶解性； ②可使成分间分开； ③待测组分的Rf在合适的范围之间（除另有规定外，在杂质检查时，各杂质斑点的比移值Rf以在0.2-0.8之间为宜）； ④不与待测组分或吸附剂发生化学反应； ⑤沸点适中，黏度较小； ⑥展开后组分斑点圆且集中； ⑦混合溶剂最好用新鲜配制。 流动相的选择： 一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷己烷苯乙醚乙酸乙酯丙酮乙醇甲醇 根据被分离物的极性，先用单一溶剂展开，若Rf值太小，则加入一定量极性强的溶剂，如乙醇、丙酮等；如果Rf值太大，则加入适量极性弱的溶剂(如环己烷、石油醚等)，以降低极性。可加入一定比例的酸或碱,使斑点集中。 ;流动相选择与使用时需注意的问题： 许多溶剂有吸湿性，使溶剂含水量不一致，导致实验难以重现。 溶剂储藏时间和条件对溶剂质量影响，应注意出厂日期。 对于易挥发的溶剂，难于配制稳定组成的流动相。要求操作格外小心，同时混合流动相不应重复使用。 混合流动相组分之间（或杂质）可能发生相互作用。 混合流动相组分要充分混匀形成均相。 一些溶剂如氯仿、乙醚一般含有微量乙醇作保护剂，有时需重蒸除去乙醇。 ;④显色装置 薄层极展开后，有的需用试剂（显色剂）显色。涂布显色剂有喷雾法和浸渍法，以及熏蒸法。 喷雾法显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体是显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍法显色可用专用玻璃器械或用适宜展开缸代用，将展开后的薄层板平稳放入有显色剂的浸渍槽中数十秒至1分钟后取出（指净薄层板背后的残存试剂）显色；熏蒸法显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。 ;显色剂可以分成两大类：一类是检查一般有机化合物的通用显色剂;另一类是根据化合物分类或特殊官能团设计的专属性显色剂。 通用显色剂 常用的有一定比例的硫酸-水溶液、硫酸-甲醇或乙醇溶液等，喷后110℃烘烤，不同有机物有不同显色；碘蒸汽熏蒸， ?对很多化合物显黄棕色； 5%磷钼酸乙醇溶液 喷后120℃烘烤，还原性化合物显蓝色等。 专属性显色剂 由于化合物种?类繁多，因此专属性显色剂也是很多的，以下是列举几例常用专属性显色剂： 改良碘化铋钾，对含氮有机化合物，如生物碱等显色，结果：呈橙红色斑点；茚三酮，对氨基酸、胺与氨基糖类等显色，结果：呈红紫色斑点；磷钼酸乙醇液，喷后在140℃加热5～10min，皂苷元均显深