+细胞融合与体细胞杂交剖析.pptVIP

* * * 杂种植物的鉴定 * 思考题 1.该论文的研究目的和意义是什么？ 2.作者如何优化细胞融合的条件的？ 3.作者如何优化融合体的培养条件的？ 4.如何进行杂种植物的鉴定？ 5.是异源融合还是同源融合？为什么杂种植物染色体少于亲本总和（油菜2n=38,紫罗兰2n=14,2n=52）？ 6.为什么原生质体密度高不利于原生质体融合？ 7.为什么说融合体一定程度上的聚集利于细胞分裂？ 8.与生长素需求相比，为什么对分裂素的需求不明显？ * * 本节小结： ?? 细胞融合：原理、方法、关键环节 ?? 体细胞杂交育种：克服有性不亲和性，实现 远源 遗传重组；多基因控制性状；细胞质遗传。 本节补充阅读文献 * * 用基因组或互补染色体的碱基序列来定义的生物遗传特征和遗传表现。基因型是指生物的遗传型，即控制性状的基因组合类型。是生物体从它的亲本获得全部基因的总和。一个生物体的性状是很多的，那么，控制这些性状的全部基因就称为生物体基因型。但一般是指生物体被研究的性状的有关基因的组成，它是性状表现的内在因素，基因型肉眼看不到，可以通过杂交实验来鉴定。一般用符号来表示。如豌豆高茎的基因型可用DD或Dd表示；矮茎可用dd表示。 * * 有生物学家估计，有多达10%的动物物种和25%的植物物种会偶尔和不同物种进行交配. * 物种是自然界能够交配、产生可育后代，并与其他种存在有生殖隔离的群体。 细胞中的一组非同源染色体，它们在形态和功能上各不相同，但是携带着控制一种生物生长发育、遗传和变异的全部信息，这样的一组染色体，叫做一个染色体组。 * 亚种是某个种的表型上相似种群的集群，栖息在该物种分布范围内的次级地理区，而且在分类学上和该种的其他种群不同。 次于种的一个种级分类等级，为国际动物命名法规所承认的最低分类等级。 同种生物不同亚种之间可以交配繁殖可育后代。例如：黄种人与白种人。 与同一种内的其他居群在地理分布上界线明显、形态特征上有一定差异的居群。 亚种由于进一步的地理隔离导致生殖隔离而发展成为新的物种。 * milldle lamella----中间层. 优点：可以获得大量的原生质体，而且几乎所有的植物或它们的器官组织或细胞均可用酶解法获得原生质体。 缺点：酶制剂中均含有核酸酶、蛋白酶、过氧化物酶以及酚类物质。影响所获原生质体的活力。 * * Percoll: 经过聚乙烯吡咯烷酮(polyvinyl pyrolidone, PVP) 处理的硅胶颗粒混悬液 Ficoll: 聚蔗糖 * 低渗爆破法:针对有无细胞壁. FDA法：FDA（二乙酸荧光素）是一种非极性物质，能自由地穿越细胞质膜，在活细胞内，FDA被酯酶裂解即发荧光（荧光素），由于荧光素不能自由通过质膜，因而可以在荧光显微镜下通过具荧光的细胞的观察确定细胞活性。 * （2）高pH的高浓度Ca2+离子诱导融合 1973年，凯勒（Keller）和梅尔切斯（Melchers）发现采用强碱性（例如pH10.5）的高浓度钙离子溶液（50mmol/L CaCl2?2H2O）在37℃下处理两个品系的烟草叶肉原生质体，很容易促使融合，融合率可以达到10%。 钙离子中和原生质体膜或细胞膜表明表面电荷，使彼此紧密接触，决定质膜的稳定性和可塑性；高pH能改变质膜的表面电荷，利于细胞融合。 * （3）PEG诱导 聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)是一种多聚化合物，分子式为H(OHCH2-CH2)nOH)。常用的PEG平均分子量在200－20,000之间，分子量1,000以下者为液体，1,000以上者为固体。 PEG分子具有轻微的负极性，可以与具有正极性基团的水分子、蛋白质、碳水化合物形成氢键，在相邻的原生质体间起到分子桥的作用，使原生质体接触。 当PEG分子被洗脱时，膜电荷发生紊乱而重新分配。此时，一种原生质体上带正电的基团可能与另外一个原生质体中带负电的基团相连，导致原生质体融合。 * （4）高Ca2+和pH诱导PEG结合诱导 * 细胞融合例子1 甘蓝与大白菜的化学诱导融合 * * * * * 3 物理法 电融合诱导法（Electrofusion）：利用电场来诱导细胞彼此连接成串，再施加瞬间强脉冲促使质膜发生可逆性电击穿，促进细胞融合的技术。 原理：在直流电脉冲的刺激下，细胞膜或原生质体质膜表面的电荷和氧化还原电位发生改变，使异种细胞或原生质体粘合并发生质膜瞬间破裂，进而连接，直到闭合成完整的膜形成融合体。 优点：融合率高、重复性与可控制性强。 缺点：可能会造成不可恢复的细胞损伤。 * * 细胞融合举例2