细胞工程思考题河科大生工用.docVIP

绪论 名词 动物细胞工程：指按照一定的设计方案，通过在动物细胞、亚细胞或动物组织水平上进行实验操作，获得重构的细胞、组织、器官以及个体，创造优良品种和产品的综合性生物工程。包括细胞培养技术（包括组织培养、器官培养）；细胞融合技术；克隆技术。细胞（组织）培养：细胞培养和组织培养都属于体外培养，是指生物细胞和组织在离体条件下的生长和增殖。是细胞工程的最基本技术。 细胞融合：又称细胞杂交，是指两个或两个以上的细胞融合形成一个细胞的过程。 细胞核移植：利用显微操作技术将细胞核与细胞质分离，然后再将不同来源的核与质重组，形成杂种细胞。 胚胎工程：以生殖细胞和胚胎细胞为对象进行的操作，主要技术包括体外受精、胚胎切割、胚胎移植等。 干细胞：是动物体内具有分化潜能，并能自我更新的细胞，分为胚胎干细胞和组织干细胞。 细胞工程是一门什么样的学科？它的主要学科背景是什么？ 细胞工程是指按照一定的设计方案，通过在细胞、亚细胞或组织水平上进行实验操作，获得重构的细胞、组织、器官以及个体，创造优良品种和产品的综合性生物工程。根据研究生物类型不同细胞工程可分为动物细胞工程、植物细胞工程、微生物细胞工程。根据实验操作对象不同可分为细胞与组织培养、细胞融合、细胞核移植、染色体操作、转基因生物等。 学科背景：生物工程、发酵工程、酶工程、基因工程、蛋白质工程、生物化学工程。 特点：1、前沿性；2、争议性；3、综合性；4、应用性。 第一章 细胞工程实验室与普通实验室有何不同？ 细胞工程实验室有无菌操作室（更衣间、缓冲间、操作间）、培养与观察室、制备室、储藏室、清洗和灭菌室，植物细胞工程还有鉴定室和驯化移植室，严格要求清洁、防尘，无菌操作室还要求密封、防霉。而普通实验室卫生要求不严谨，而且没有这么多的分间，操作、培养、观察制备等都在一个房间内完成。 第三章 使用超净工作台应该注意那些事项？ ①使用前30分钟开启紫外灭菌灯，对工作区域进行照射杀菌； ②使用前20分钟开启通风机； ③使用时，关闭紫外灭菌灯，开启日光灯； ④使用完毕，应擦净工作台面，开启紫外灭菌灯消毒灭菌，20分钟后关闭紫外灯，关闭洁净台电源； ⑤操作区不允许放置不必要的物品，保持洁净、气流通畅； ⑥挡风玻璃上下移动时不要用力过猛，以防玻璃破损伤人； ⑦长期不使用的工作台要拔下电源插头； ⑧请勿在周围有人时开启紫外灯。 培养细胞常见的污染有那些？简单说明检测方法。 ①细菌的污染及检测：肉眼直接观察法、显微镜观察法、培养检查法 ②真菌的污染及检测：肉眼直接观察法、显微镜观察法 ③支原体污染及检测：相差显微镜观察、荧光染色法观察、电镜检测、培养检测 ④病毒的污染及检测：细胞的直接观察、动物接种检查、电子显微镜观察、免疫学检查、⑤PCR技术 ⑤细胞交叉污染及检测：观察细胞的形态、检查细胞的标记 第四章 名词 原代培养：是将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。 传代培养：是将原代培养的细胞分离、稀释并转接到新种培养基上继续扩大培养的过程，细胞的体外大量增殖是通过传代来培养实现。 细胞系：是指由原代培养经初步纯化，获得的以一种细胞为主的、能在体外长期生存的不均一的细胞群体。 细胞株：是指细胞系经进一步的克隆化，得到的由单一细胞组成的群体。 体外培养细胞分那几类？ 贴壁型：上皮样细胞、成纤维细胞、游走型细胞、多形型细胞 悬浮型：生长时不贴壁，如淋巴细胞、白细胞和某些肿瘤细胞 细胞系的生长过程包括那三个阶段 ？各阶段细胞有何特点？ ①原代培养期：为新鲜组织自体内取出并在体外培养生长至第一次传代的时期。这一阶段比较活跃，细胞多呈二倍体核型。 ②传代期：原代培养的细胞生长一定时间之后，如贴附型细胞即融合成片而逐渐铺满底物的表面，此时应将原代细胞分开接种至2个或更多的新的培养器皿中，即传代，此即成细胞系。 ③衰退期：一般有限细胞系在此期的细胞开始时虽仍然存活，但增殖已很缓慢并逐渐完全停止，进而细胞发生衰退死亡。 影响细胞生长的因素有那些？为什么？ 细胞同步化培养主要有那些方法？依据的原理是什么？ ①选择细胞同步化：M期细胞震摇脱落法；离心洗脱法；梯度沉降法。 ②诱导细胞同步化法：血清饥饿法（G1）；异亮氨酸营养缺乏法（G1）；DNA合成抑制剂阻断法（S）；秋水仙素阻断法（M）。 原理课件上没有，找课本或上网查去啊~ 第五章 细胞融合的方法有那些？依据的原理是什么？ ①PEG介导的融合：PEG带有大量的负电荷，和细胞表面的负电荷在钙离子的连接下，形成静电键，促使异源细胞间的粘着和结合，在高pH、高钙离子的溶液的作用下，将钙离子和与质膜结合的PEG分子洗脱，导致电荷平衡失调并重新分配，使两种细胞上的正负