牛乳中硫氰酸钠的检测.pptVIP

牛乳中硫氰酸钠的检测 一、硫氰酸钠的简介： 1、硫氰酸钠是白色斜方晶系结晶或粉末。在原料乳或奶粉中掺入后可有效抑菌、保鲜，是不法奶户的掺假物质之一。少量硫氰酸钠的摄入即会对人体造成极大伤害。 2、来源：人为掺加以提高乳中蛋白质，防腐。 二、原理： 用三氯乙酸除去乳中的蛋白质，与硝酸铁溶液反应生成三价铁的化合物，使用460nm波长测定吸光度。 三、试剂： 1、三氯乙酸溶液（0.2kg/L）：20g三氯乙酸溶于100ml蒸馏水中，并过滤待用。 2、硝酸铁溶液：将138.5ml65%的硝酸稀释于1000ml蒸馏水中，即得到2mol/L的硝酸溶液。然后将16g的硝酸铁溶于50ml浓度为2mol/L的硝酸中，用蒸馏水稀释定容到100ml。溶液避光冷藏。 四、检测方法： （一）、分光光度计测定 1、样品处理：准确吸取8.0ml牛乳和4.0ml0.2㎏/L的三氯乙酸溶液混合（边加边摇），混合物充分混匀后至少静置30min，过滤. 2、显色反应：准确移取3.0ml上述澄清的滤液和3.0ml硝酸铁溶液，充分混匀，待用。 3、空白实验：用3.0ml蒸馏水和3.0ml硝酸铁溶液相混合，待用。 4、测定：加入硝酸铁后，在10min内，用波长460nm的分光光度计进行吸光度的检测（先测空白，再测样品）。 插播：分光光度计的使用 1、打开仪器左后方的电源开关，要预热30min后使用。 2、按仪器上数字键1（光度测量）；然后按F1（参数测定）；然后按数字键2（测定波长），输入“460”，按ENTER键确认;然后按RETURN键返回；然后按ZERO键清零。 3、打开仪器，放入空白，按START键开始测定，再放入样品测定，记录数值。 4、测定完毕后，按RETURN键，再按ENTER键回到主界面，关闭电源。 二、酶标仪法：（了解） 1、样品处理：准确吸取4.0ml牛乳和 2.0ml0.2㎏/L的三氯乙酸溶液混合（边加边摇），混合物充分混匀后至少静置30min，过滤. 2、显色反应：准确移取1.0ml上述澄清的滤液和1.0ml硝酸铁溶液，充分混匀，待用。 3、空白实验：用0.5ml蒸馏水和0.5ml硝酸铁溶液相混合，待用。 4、测定：加入硝酸铁后，在10min内，准确移取200ul显色液于空白酶标板中，用波长450nm的酶标仪进行吸光度的检测。 五、硫氰酸钠标准曲线： 1、试剂： 1.1硫氰酸钠标准储备溶液：准确称取（0.1000±0.0003）g硫氰酸钠（分析纯）用蒸馏水定容到100ml，配制成浓度为1mg/ml的储备液。 1.2硫氰酸钠标准工作溶液：准确移取10ml硫氰酸钠储备液，用蒸馏水定容到100ml，配制成浓度为100ug/ml(微克/毫升)的工作液，现用现配。 1.3硫氰酸钠标准水溶液：分别移取2、4、8、10、16、20ml的硫氰酸钠工作液于100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容后，配成浓度分别为2、4、8、10、16、20ug/ml的标准水溶液，待用。 五、硫氰酸钠标准曲线： 2、标准曲线的制作： 将不同浓度的硫氰酸钠标准水溶液分别准确吸取8ml，同样品一样进行逐步样品处理、显色反应、测定后，根据浓度和对应的吸光值制作标准曲线（以硫氰酸钠浓度为横坐标，吸光度为纵坐标），得到的标准曲线的相关系数必须达到0.999以上方可使用。 插播：标准曲线方程的制作 1、将数据整理好输入Excel，并选取完成的数据区，并点击插入图表.先在图表类型中选“XY散点图”，并选了图表类型的“散点图”（第一个没有连线的）。 　2、点击“下一步”，数据区域选中浓度和吸光度值-空白值两栏，系列产生在列，点击下一步，点完成。　 　3、现在需要根据数据进行回归分析，计算回归方程，绘制出标准曲线。其实这很简单，先点击图上的标准值点，然后按右键，点击“添加趋势线”。“类型”处选择线性（第一个），“选项”处在显示公式和显示R平方值前勾上。点确定。好了，现在公式和相关系数都出来了。如图：呵R的平方达0.9997，线性相当好。 六、结果计算： 测定样品的吸光度，经标准曲线方程计算出样品中硫氰酸钠含量。其中Y为样品吸光度值-空白值，求X（样品中硫氰酸钠含量）。如上图所示： 即X=（Y+0.0165）/0.0269 七、注意事项： 1、反应生成的带颜色的络合物是不稳定的，因此本试验从键入硝酸铁溶液开始，必须在10min内完成。 2、由于硫氰酸根为动物所有组织和分泌物中存在的阴离子，所以我们暂定乳中的硫氰酸钠含量应低于15㎎/L，国家标准出台后，执行国家标准。 3、使用分光光度计时，最好使用同一个比色皿。