原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
1938 Behrens nuclei and cytoplasm from liver cells (differential centrifugation) 1951 Brakke plant virus (density-gradient centrifugation ) De Duve lysosomes, peroxisomes Meselson, Stahl, Vinograd separating nucleic acid (equilibrium density gradient centrifugation in cesium chloride solutions ) 1984 Rothman reconstitute Golgi vesicle trafficking in vitro 离心技术发展和细胞器分离 From “Current protocols in cell biology” 四.细胞结构成分的分离 细胞沉淀 细胞破碎 细胞结构成分的分离－离心技术 4.分离细胞器的鉴定和评价 5.举例：线粒体分离、细胞核分离(略） 1. 介质密度为1g/ml; 2. 一般细菌和动物细胞密度为1.08-1.12g/ml, 病毒密度为1.18-1.31 g/ml。 3. 相对离心力 (g)和离心时间（min)决定沉降 材料 大小(?m) 离心条件(离心力，离心时间） 动物细胞 10-60 200-500g 5-15min 人红细胞 6- 8 500g 5-15min 细菌 1-10 500-6000g 10-15min 病毒 0.02-0.03 30000-40000g 20-30min 1.细胞沉淀（cell pellet) 2.细胞破碎 * 渗透压冲击 * 超声波振荡 * 机械力研磨或剪切 * 反复冻融 原则：只需破碎细胞膜，保留完整细胞器 3.细胞结构成分的分步分离 一系列的差速离心＋密度梯度离心 差速离心：分离细胞器 梯度离心：纯化细胞器 沉淀 RCF×时间 内容物 P1 1000g*10min 细胞核、重线粒体、大片细胞膜 P2 3000g*10min 重线粒体、细胞膜碎片 P3 6000g*10min 线粒体、溶酶体、过氧化物酶体、完整高尔基体 P4 10，000g*10min 线粒体、溶酶体、过氧化物酶体、高尔基膜 P5 20，000g*10min 溶酶体、过氧化物酶体、高尔基膜、大的高密度小泡 P6 100，000g*10min 细胞膜、高尔基体、内体等 差速离心形成的沉淀（肝脏） 差速离心 差速离心需要的设备 离心机：低速、高速、超高速 转头： 固定角、垂直或水平 介质： 蔗糖 密度梯度离心 梯度离心需要的设备 离心机：低速、高速、超高速 转头： 水平、固定角、垂直 介质： 蔗糖、Ficoll, Percoll, Accudenz (Nycodenz), Metrizoate 介质的梯度形成装置和收集装置 4.离心方法的选择 匀浆物中各类细胞器大小不同： 差速离心 上清中各类细胞器大小有差别： 速率区带离心 上清中各类细胞器密度有差别： 等密度离心 根据分离细胞器的性质： 根据研究目的： 分
文档评论（0）