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马铃薯;微型薯; 马铃薯营养繁殖时易受病毒浸染,当条件适合时,病毒就会在植株内增殖,转运和积累,随着世代传递,病毒危害逐年加重,一般造成减产50%以上。研究发现,有30多种病毒易感染马铃薯,并引起品种退化,严重影响马铃薯的生产。通过微茎尖组织培养技术能从马铃薯体内脱除PVY、PVA、PAF、PVG、PVM、PSW等病毒。; 全国现有马铃薯播种面积300多万公顷,且有逐步增加的趋势,每年需合格种薯45亿公斤,脱毒原种4亿公斤,脱毒小薯或微型薯45亿粒。因此,脱毒马铃薯推广具有广阔的市场前景。
采用组培技术,通过一定良种繁殖体系,生产优质种薯,是保证马铃薯高产、稳产的一项有效措施。; 1.脱毒种薯生产程序
用微茎尖组织培养法,诱导出苗,联免疫吸附法或指示植物法鉴定马铃薯病毒,经鉴定后无主要病毒的试管苗可定为脱毒试管基础苗。; 试管基础苗在无菌条件下,采用固体、液体培养基相结合的方法,进行扩繁基础苗,在防虫网室栽植或封闭温室扦插,生产出原原种(或称脱毒小薯)。用原原种在一定隔离条件下产生原种1代,以后逐级称为原种2代、良种1代、良种2代。;2.茎尖培养脱毒
(1) 取材和培养; 消毒芽在解剖镜下仔细逐层剥去幼叶,露出圆滑的生长点,可留1-2个叶原基,0.2-0.3mm,接种于液体培养基:
MS +BA0.5+NAA0.1+ GA30.2 +2%蔗糖,p H值5.8。
培养条件:21~25℃、2000-3000 lx、12h/d。
3--6月长成2-3cm小芽。; (2) 继代和生根
脱毒苗经ELISA(试剂盒)鉴定
后,采用固、液培养基相结合方法
扩繁。取试管苗单节切段扦插,
每瓶插20个茎段,20d长成5-10cm
高小植株,继续切段繁殖,每月可繁5~8倍。 试管苗多节接种进行浅层静止液体培养。
培养基: MS+NAA 0.2-0.5+D-泛酸钙10+3%蔗糖,20-25 ℃ ,3000-4000LX,14-16h/d,每3周继代一次,单芽茎段约1cm,可插也可平放,原则试管苗用2年-3年。
(3) 驯化移植
;3. 脱毒苗切繁
基础苗成活后便可切繁,但切繁量的多少和质量的高低,除与水与温湿度条件有关外,正确的切繁方法和适宜的切繁苗龄也非常重要。脱毒苗切繁主要是剪取顶部芽尖茎段(主茎芽尖和腋芽芽尖)直接扦插。 ;微型薯生产:
网室内铺6cm蛭石,
3%撒可富稀释1倍,喷潮湿即可。
插前浇水湿润,插后浇透。
覆膜7d,湿度80%以上,期间喷水2次。
揭膜后喷营养液3%撒可富,每周2次,每周喷一次0.5%硫酸铜,中后期喷药防病虫,连续喷2-4次。
苗高6-8cm培蛭石防绿薯,1-2cm厚,35-40d出现气生薯,不断盖蛭石。;二、马铃薯无病毒苗的鉴定材料
1、指示植物鉴定
在马铃薯的病毒鉴定中,汁液鉴定是最常用的方法,X病毒、S病毒和纺锤块状病毒很容易通过汁液来接种。
2、鉴定寄主的准备
马铃薯常用的鉴定寄主植物有苋科的千日红,茄科的洋酸浆、毛曼佗罗等。寄主植物应在无虫网室中培养。
3.接种液制备及接种
放置防虫室中,一般5-10d可发病。;三、马铃薯无病毒株的繁殖和保存
通过茎尖培养只能得到很少的无病毒植株,而生产上需要数以万计的健康种薯。同时无病毒植株并没有对该病毒获得免疫能力,仍会在繁殖中再次侵染。如何在以后繁殖中防止受病毒再侵染是很关键的一环。
繁殖主要:
(1) 直接块茎繁殖
(2) 扦插繁殖
(3) 组织培养切段繁殖
A:继代培养
B:低温保存
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