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显微技术 马玉堃 生命科学学院 2007年3月 * 第六节 各种实用研究显微镜 一、相差显微镜 基本原理: 普通光学显微镜可以很好地观察到经固定染色的细胞显微结构，但很难观察到活的细胞显微结构。这是因为人的眼睛只在光的波长(颜色)和振幅(亮度)变化时才能观察到被检的物体，而活细胞或未经染色标本多为无色透明，当光波被通过时，其波长和振幅并没发生什么变化，所以无法辨认。为了观察活细胞的显微结构，就需要使用相差显微镜。 相差显微镜与普通显微镜主要不同之处在于用环状光栏(annular diaphragm)代替可变光栏(changeable diaphragm)，用带相板(phase plate)的物镜(通常用“ph”标志)代替普通物镜，并带有一个合轴调中望远镜(telescope)及滤色片。 这些特殊装置能使活细胞或未经染色的标本中各部分的折射率或厚度的微小差异，产生相位差，然后利用光的衍射和干涉的原理，把相差变成振幅(明暗)之差，使人的肉眼能够辨认出来。 活细胞或未染色标本虽无色透明，但其各部分的折射率和厚度还是会有微小的差异，当光波通过时，光波在各部分的滞留时间会有不同，即光程会有微小差异，因而光波的相位会发生微小的变化，其光程与相位的关系如下： 1．光速与折射率关系 我们知道，单色光在不同媒质中的光速C与媒质的折射率n成反比，即： C1、C2