图位克隆李金伟绪论.pptVIP

图位克隆发展的最新动向 基因和与品质改良有关的基因对于我国的高技术产业、卫生保健、农业生产和权益保护等具有特别重要的意义,毫无疑问,图位克隆对于分离这些基因必将发挥重要的作用. 图位克隆技术原理 参考文献： 1.宋成标.图位克隆基因原理与方法.海南生物技术研发与发展研讨会论文集.2006.5 2.吕洪坤.图位克隆技术在玉米基因分离中的应用.分子植物育种.2013. 3.闫其涛.植物基因分离的图位克隆技术.分子植物育种.2005. 4.童继平.水稻功能基因图位克隆研究进展.中国生物工程杂志.2012 5.景润春.图位克隆技术在分离植物基因的应用.武汉大学发育生物学研究中心武汉大学遗传研究所.2000 6.赵佳.拟南芥中ABA与WUS的关系分析及三个圆叶突变体的图位克隆.细胞生物学.2014 7. 王泽立.植物基因的图位克隆.生物技术通报.2000 图位克隆在植物基因分离中的应用 图位克隆在植物基因分离中的应用 图位克隆在植物基因分离中的应用 图位克隆在植物基因分离中的应用 图位克隆技术原理 李金伟 2012215423 无论头上是怎样的天空，我准备承受任何风暴。 内容简要 图位克隆技术的基本原理 1 图位克隆的一般步骤（考研） 2 图位克隆在植物基因分离中的应用 3 图位克隆的现状和前景 4 图位克隆技术的基本原理 图位克隆(Map?- based cloning) 又称定位克隆(positional cloning) , 1986 年首先由剑桥大学的Alancoulson 提出，是近几年来随着各种植物的分子标记图谱相继建立而发展起来的一种行的基因克隆的一种方法 图位克隆技术的基本原理 基本原理： 功能基 因在基因组中都有相对较稳定的基因座，再利用分子标记技术对目的基因精细定位的基础上，用与目的基因紧密连锁的分子标记筛选DNA文库（包括YAC,BAC,TAC或Cosmid等），从而构建基因区域的物理图谱，再利用此物理图谱通过染色体步（chromosome walking）逼近目的基因或通过染色体登陆（chromosome landing）方法最后找到包含有该目的基因的克隆，最后经过遗传转化试验证实目的基因功能。 图位克隆的一般步骤 图位克隆的主要步骤 （复旦大学2003细胞生物学考研试题） 图位克隆的一般步骤 2.1 2.2 2.4 筛选与目的基因紧密连锁的分子标记 目的基因的定位 目的基因的筛选和鉴定 2.3 构建高质量、容易操作的大片段基因组文库 图位克隆的一般步骤 2.1筛选与目的基因连锁的分子标记 筛选与目标基因连锁的分子标记（molecular markers）是实现基因图位克隆的关键。实质上，分子标记是一个特异的DNA片段或能够检出的等位基因，精确的分子标记能够极大地提高图位克隆的效率。 迄今为止，已有几十种技术可用于分子标记的筛选，包括有：RFLP标记、RAPD标记、AFLP标记、SSLP标记、SSR标记、SNP标记等。其中最为常用的是简单序列长度多态性（SSLPs）和单核苷酸多态性（SNPs） 图位克隆的一般步骤 SSLPs SSLP是基于PCR的分子标记，检测比较直接，只需要通过设计引物便可检测鉴定的SSLP标记 最为常用的分子标记 SNPs SNPs标记的检测也比较直接，它是不同生态型之间基因组中的单个核苷酸的差别，这些差别的核苷酸通常位于不编码区域，常见的检测SNPs标记的方法主要是剪切扩增多态性序列（CAPS），它是基于PCR的 图位克隆的一般步骤 图位克隆的分子标记示意图 图位克隆的一般步骤 2.2目的基因的定位 目的基因的定位分为初定位和精细定位 图位克隆的一般步骤 2.2.1初定位 目的基因初定位是利用分子标记在一个目标性状的分离群体中把目的基因定位于染色体的一定区域内。 初定位通常使用近等基因系法或群组分离分析法。近等基因系是指只有目标性状基因有差异其他性状基因相同的2个群体，可以通过连续回交的途径获得。群组分离分析法，将分离群体中的研究的目标性状根据其类型分成2组，将每组内一定数量的植株DNA等量混合，形成2个池，这2个池仅在目标性状上有差异。利用分子标记技术寻找2个池的扩增 谱带的差异，这种多态性极可能与目标基因连锁。用所有的分离后代单株，验证该多态性是否真正与目标基因连锁及连锁距离的确定。如果分离群体不易获得，可采取混合样品法 图位克隆的一般步骤 2.2.2精细定位（最艰难、最耗时的限速步骤） 在初步定位的基础上，接下来就要利用高密度的分子标记连锁图对目的基因区域进行区域高密度分子标记连锁分析