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一 基因工程  梁明祥 案例一 转基因玉米 n275190056.shtml /c/sd/2010-09-21/130521147943.shtml 转基因杂交玉米品种：先玉335（美国先锋公司 ），其父本含有转基因 产量高等优点 国内最大的玉米种子公司：登海种业 该品种经销商，同时也研发了登海3686 等转基因品种，该品种在2010年12月农业部发布的1504号《公告》中被要求停止生产。 其理由是我国还没有放开玉米等转基因品种的商业化生产 已经获得批准： 棉花 杨树 木瓜 番茄牵牛花 甜椒 案例二 转基因水稻 /post/12456/651015 案例三 国家转基因专项（35亿！） 全球转基因作物种植情况 种植面积：1996年170万公顷, 2010年10亿公顷(150亿亩) 对比 中国18亿亩耕地 种植国家：1996年6国，2009年25国，种植农户1400万 另有32个国家（共计57国）准许转基因作物及其产品进口 先后批准种植的转基因作物：24种155个材料（ISAAA Brief 41, 2010） 引用于/news/2011-03/25/contenthtm 转基因品种和常规品种种植比例 基因工程（gene engineering）或称重组DNA技术（recombinant DNA technique）  是指将获取的目的基因片段在体外与载体DNA通过入工剪切、编接构成DNA重组体，将其导入受体细胞并使之无性繁殖（称之为“克隆”）和 表达，这种有目的的应用分子克隆技术,人为的改造基因,改变生物的遗传性状的系列过程,总称为基因工程. 染色体 植物与动物基因差异 拟南芥已发现有2.5万个基因，人类4万。 植物的基因多组成一个基因家族，但人类的基因多为单个。 植物的基因片段多在1K以下，但人类一般均在10K以上。 实际当中的具体问题 如何通过提高植物产量，抗逆境（盐害，干旱，冷害等），缩短生长周期 如何验证某一基因的功能 转基因如何做，流程？ 植物转基因的流程 见动画 微生物的转基因，流程类似植物但更简单。 1.1 目的基因的获得 基因工程的原料就是目的基因。所谓目的基因，是指已被或欲被分离、改造、扩增和表达的特定基因或DNA片段，能编码某一产物或某一性状。以我研究拟南芥开花基因HAP3b为例 研究基因的序列已经知道 HAP3b的核苷酸序列已经在数据库中存在，已有的研究推测该基因可能和植物开花有关，现在要验证该基因在植物开花中的作用。 实验设计：将该基因导入到植物中并过表达该基因看转基因植物的表现型来验证该基因的功能。 获取目的基因现在基本是通过PCR的方法获得。 如何通过PCR方法获得目的基因 什么是PCR技术 利用DNA聚合酶对特定基因做试管内?(In?Vitro)?的大量合成 PCR技术需要哪些条件 PCR仪 就是一个可以自动控温的 水浴锅 PCR反应的条件 缓冲液，Taq酶，需要扩增的目的基因模板，引物，dNTP. 其中缓冲液，酶，dNTP均有公司直接提供。 基因模板从何而来（一般可以从植物基因组DNA或者提取植物RNA，反转录成cDNA作为模板） 一般PCR反应的体积在20ul-100ul之间 引物如何设计 学习如何使用DNA*软件 软件如何获得：互联网 PCR反应设计流程 模板DNA的变性 93-95度 模板DNA与引物的退火(复性) 55-65度 引物的延伸 72度 一般1分钟1KB 计算延伸时间 一般循环为25-35 个 PCR 动画 /v_show/id_XMTY1ODg4Nzgw.html PCR跑完了干什么？ DNA 电泳 什么是DNA 电泳 目的DNA片段的分离 两种电泳 （1） 聚丙烯酰胺凝胶电泳??适合分离1kb以下的片段，最高分辨率可达1bp，也用于分离寡核苷酸，在引物的纯化中也常用此中凝胶进行纯化，也称PAGE纯化。  （2） 琼脂糖凝胶电泳??可分离的DNA片段大小因胶浓度的不同而异，胶浓度为0.5～0.6%的凝胶可以分离的DNA片段范围为20bp～50kb。一般我们用1%的浓度。电泳结果 用溴化乙锭（EB）染色后可直接在紫外下观察或者凝胶扫描系统拍照，并且可观察的DNA条带浓度为纳克级，而且整个过程一般1小时即可完成。由于该方法操作的简便和快速，在基因工程中较常用。 电泳原理 DNA为碱性物质，在电泳（缓冲液pH=8）时带负电荷，在一定的电场力作用下向正极泳动。而DNA链上的负电荷伴随着DNA分子量的增加而增加，荷质比是一常数，故电泳中DNA的分离类似分子筛效应。