07+细菌的遗传分析.ppt

* LFT裂解液感染gal－细菌产生两种类型的转导子： 第一类：野生型λ在正常的attλ位点整合，接着λd gal+噬菌体在普通的λ序列通过交换整合，产生一个双重溶原（double lysogen）。细菌是杂合子gal+/gal－ ，因此能发酵半乳糖。这种类型的转导子（λdgal+/gal－ ）不稳定，因为用紫外线处理这种转导子可以诱导λ溶解。野生型λ有一套完整的基因组可用于病毒的复制，所以它控制自己和λdgal+的切离和复制，这里野生型病毒作为一个helper phage。所产生的溶菌产物包含约一半正常的噬菌体和一半λdgal+转导噬菌体，这种新的溶菌液叫做高频转导（high frequency transduction,HFT）溶菌液。 * 第二类转导子：只有一个λdgal+噬菌体感染一个细胞，λdgal+与E.coli gal－通过双交换（重组），产生λdgal－。这样的转导子是稳定的，因为细菌染色体上只有一种类型的gal+基因，没有噬菌体基因的整合。 * * 7.4 细菌同源重组的机制 7.4.1 细菌同源重组的特点 7.4.2 细菌同源重组的分子基础 * 7.4.1 细菌同源重组的特点 ★ 细菌的转化、接合和转导重组都是同源重组。 （homologous recombination） 细菌中的重组发生在一个完整的环状双螺旋DNA分子与一个单链或双链DNA分子片段之间，而且没有相对应的（相反的）重组子。 重组发生在单链DNA片段和完整的双链DNA之间， 供体单链与受体DNA之间结合形成一段异源双链区，最后结果取决于错配修复。 无重组发生：校正切除的是异源双链区中的属原供体单链的核苷酸。 * 若无修复校正作用，则该细菌分裂后产生两个细胞，一个是受体的基因型，另一个是重组体的基因型。 高效率标记（high-efficiency marker）：有些遗传标记在转化中很少发生校正作用，或校正切除几乎总是在受体DNA上，因此转化频率较高，这类遗传标记称为～。 低效率标记（low-efficiency marker）：另一些遗传标记在转化中的校正切除总是倾向于发生在供体单链上，因而表现出很低的转化频率，这类标记称为～。 * 大肠杆菌的接合重组在Hfr细胞与F－细胞之间进行，前者为供体，后者为受体。接合时DNA重组的机制类似转化，但过程更为复杂。 细菌的转导重组则不同于转化与接合重组机制。其重组都是在双链DNA片段和完整DNA分子之间发生，转导DNA以双链形式被注入受体细胞，然后以双链形式结合进受体染色体中。 * 7.7.2 细菌同源重组的分子基础 （1）RecBCD识别chi序列引发重组 chi序列(chi sequence,χsequence)：大肠杆菌中与同源重组活性较高有关的一段序列，即GCTGGTGG，既是recBCD的识别序列，又是其激活序列。 在大肠杆菌DNA中，chi位点每隔5~10kb出现1次。 chi位点不是重组所必需，但chi位点可促进它附近10kb以内区域发生重组，可被特定方向上相距几个kb处断裂双链激活。 在重组过程中，chi位点是基因recBCD编码的一种酶识别位点。 * recBCD编码的酶复合体有多重活性： ① 是一种能降解DNA的核酸酶，最初作为核酸外切酶Ⅴ被鉴定。 ② 具解旋酶活性，在单链结合蛋白（single-strand binding protein，SSB）存在的条件下使双链DNA解螺旋。 ③ 具ATP酶活性。其在重组中的作用可能是提供一条含游离3′端的单链区域。 RecBCD分子量较大，由RecB、RecC和RecD组成的复合体，具有ATP依赖的外切酶Ⅴ和解旋酶活性，能与双链切口结合解开DNA链，并在Chi位点形成单链，然后由RecA蛋白促进同源重组。 * RecBCD核酸酶识别chi序列引发重组的过程是： * （2）RecA催化单链同化 E.coil 中的RecA蛋白是第一个被发现的DNA链转移蛋白，具有两种不同的活性： ① 有促进SOS反应中的蛋白酶活性。 ② 促进单链DNA与双链DNA分子中互补链之间进行 碱基配对。 以上①②两种活性都要求ATP和单链DNA存在。单链同化：RecA可使一条DNA单链置换一条双链DNA分子中同源链的反应称为～single-strand uptake or assimilation。 * 置换反应的3个一般性条件： ① 其中一个DNA分子必须有单链区域。 ② 其中有一个DNA分子