物理图谱与测序剖析.ppt

第三章DNA物理图谱的构建及序列测定 物理图谱（physical map） 物理图/限制性图谱（restriction map）是各种限制性内切酶切点在某一DNA分子或DNA片段上的排列，由于各酶切点之间的距离是以碱基对（kbp → mbp）表示的，所以可计算出二切点间的绝对距离，因此限制图也称物理图。物理图谱的构建是基因组研究的重要组成部分。 一、限制性核酸内切酶（restriction endonuclease） 细菌核酸内切酶 识别、剪切特殊双链DNA序列 用途：DNA物理图谱构建、DNA序列分析、基因分离、基因定位、DNA重组 1.细菌的 修饰作用和限制性核酸内切酶的发现 20世纪50年代，Luria Human、Bertani Weigle： 噬菌体 →细菌菌株1，正常生长。 →细菌菌株2，生长受到强烈抑制；少数存 活，再次感染菌株2，正常生长——受到 宿主的特意修饰。机制？ 1962，Arber：宿主的修饰在噬菌体DNA上进行 1965，Arber：宿主对入侵噬菌体的修饰与噬菌体DNA降解密切相关；预言细菌中存在位点特异性限制酶；修饰是宿主甲基化酶作用结果：建立细菌限制-修饰（R-M）系统概念。 Arbe