[医学微生物学]病毒感染的检查方法和防治原则分析.ppt

1）掌握病毒的分离培养方法； 2）熟悉标本的采集与送检原则、病毒感染的快速诊断； 3）了解病毒感染的免疫预防、抗病毒治疗。 内 容 动物：鼠、兔、猴、黑猩猩等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高、动物 体内常带有潜伏病毒。 目前已很少应用。 鸡胚接种部位： (3) 细胞培养(cell culture) 根据细胞生长的方式分: ? 单层细胞培养（monolayer cell culture） ? 悬浮细胞培养（suspended cell culture） 根据细胞来源、染色体特征及传代次数分: ? 原代培养细胞 ? 二倍体细胞株 ? 传代细胞系或株 特点: ? 对多种病毒敏感 ? 生长能力有限, 获取成本高 ? 可携带潜伏病毒 应用: ? 病毒分离与鉴定 ? 病毒学实验研究 ? 不能用于制备疫苗 病毒鉴定： ⑴ 细胞病变效应( cytopathic effect,CPE) 病毒在细胞中增殖的指标 细胞病变效应( cytopathic effect,CPE) 红细胞吸附 病毒干扰作用 细胞代谢的改变 病毒鉴定： 50%组织细胞感染量(50% tissue culture infectious dose, TCID50) 概念: 测定病毒感染细胞后引起50%细胞病变的最小病毒量。 方法:一般是将病毒悬液作10倍的系列稀释，分 别接种细胞，经一定时间后观察CPE、血细胞吸 附等指标，以能使50%细胞感染的病毒的最高稀 释度作为终点。最后用统计方法计算出50%组织 细胞感染量。 用途: 测定感染性病毒的量和毒力 50%组织细胞感染量(TCID50) 蚀(空)斑形成试验（plaque assay） 原理：适当浓度的感染性病毒在覆盖琼 脂的细胞层上产生可见和可数的局部病 灶称为蚀斑。一个蚀斑是由一个感染性 病毒颗粒增殖而形成的，由蚀斑的数目 可以计算出原始标本中感染性病毒的含 量。 蚀(空)斑形成试验（plaque assay） 蚀(空)斑形成试验（plaque assay） 用途： ? 测定感染性病毒量 单位: PFU (plaque forming unit)/ml 由一个感染性病毒颗粒增殖而形成的一个空斑称为空斑形成单位。 ? 分纯病毒 (1) 中和试验(Neutralization test) (2) 血凝抑制试验(Hemagglutination inhibition test) (3) 免疫标记法(FIA、EIA、RIA) ⑷ 蛋白印迹(Western blot) Immunofluorescense test 数小时内出结果 形态学检查 病毒成分（抗原或核酸） 早期抗体检测（IgM） （一）形态学检查 电镜和免疫电镜检查 普通光学显微镜检查 包涵体 电子显微镜：可观察各种病毒的形态 但设备贵、操作复杂，应用受限 光学显微镜：可观察大病毒（痘病毒）和包涵体 对一般病毒检测意义不大 Electronmicrographs （二）病毒成分检测 1.病毒蛋白抗原检测 免疫标记技术 2.病毒核酸检测 核酸扩增技术 核酸杂交技术 基因芯片技术 基因测序 （三）早期抗体检测 可诊断急性感染 特异性IgM抗体：孕妇感染风疹病毒 检测早期抗原抗体是快速诊断的另一途径 EBV早期抗原抗体 SARS冠状病毒的分离和鉴定 香港大学专家：患者鼻咽标本→Vero细胞培养→CPE →EM观察：冠状病毒 随后加拿大和美国CDC等SARS国际协作组的多个实验室也培养出了冠状病毒 利用‘免疫荧光法’将分离病毒与SARS患者血清进行血清学检测，反应呈阳性 从冠状病毒基因组的保守区设计引物，采用RT-PCR方法从培养上清中扩增出了冠状病毒基因→测序→经Genbank数据库同源性比对，发现同源性为64%左右 SARS冠状病毒的分离和鉴定 加拿大专家完成了全基因组测序→发现与已知人和动物的冠状病毒的同源性差异较大→确定为一种新的冠状病毒。 荷兰的病毒学家：用这种冠状病毒感染猴子→出现了与SARS病人相同的临床表现和病理特征→再次从动物学实验证实引起SARS的病原体是这种冠状病毒 WHO将其命名为SARS冠状病毒 微生物及其代谢产物 生物制品 动物免疫血清 （biological products）免疫细胞