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分光光度分析 一、目视比色法 用眼睛观察、比较溶液颜色深度以确定物质含量的方法称为目视比色法。 通过比较溶液颜色的深浅来确定物质含量的方法称为比色分析法 根据有色物质溶液对光的吸收程度来确定该物质的含量，这种方法称为可见光分光光度法 在光谱分析中，基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法称为吸光光度法。 目视比色法其优点是仪器简单，操作简便，适宜于大批试样的分析；灵敏度高； 在复合光—白光下进行测定，故某些显色反应不符合朗伯—比尔定律时，仍可用该法进行测定。其主要缺点是准确度不高，标准系列不能久存，需要在测定时临时配制。 比浊法 比浊法是利用试剂与待测组分发生化学反应，生成的少量沉淀物悬浮在溶液 中，对 光线具有和散射作用。 将试液与杂质标准溶液做同样处理，然后比较其浑浊程度，从而测定化工产品中的微量杂质。 比色、比浊和分光光度分析灵敏度高、应用范围广泛。 分光光度计 第三，操作简便，测定快速 一般只经过显色和测定两步就可得到分析结果。 特别是近年来，一些灵敏度高、选择性好的显色剂和掩蔽剂的应用，使测定不经分离就可进行，大大提高了测定速度。 此外吸光光度分析所用仪器设备也不复杂，操作方便，容易掌握。 第四，应用广泛 几乎所有的无机离子和许多有机化合物都可以直接或间接地用比色分析法和分光光度法进行测定，所以吸光光度分析法广泛应用于工农业生产和生物、化学、医学、临床、环保等领域。 分光光度计的主要部件 a．光源 （钨灯、氢灯）通常用6～12 V钨丝灯作可 见光区的光源，发出的连续光谱在360—800nm范围内。光源应该稳定，即要求电源电压保持稳定。为此，通常在仪器内同时配有电源稳压器。 b．单色器 单色器的作用是将光源发出的连续光谱分解为单色光的装置。分为棱镜和光栅。 吸光度测量的步骤 棱镜：依据不同波长光通过棱镜时折射率不同分光 棱镜是根据光的折射原理而将复合光色散为不同波长的单色光，然后再让所需波长的光通过一个很窄的狭缝照射到吸收池上。它由玻璃或石英制成。玻璃棱镜用于可见光范围，石英棱镜则在紫外和可见光范围均可使用。 光栅：在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕(600、1200、2400条/mm )。 光栅是根据光的衍射和干涉原理将复合光色散为不同波长的单色光，然后再让所需波长的光通过狭缝照射到吸收池上。它的分辨率比棱镜大，可用的波长范围也较宽。 比色皿 也称吸收池。 用于盛放试液的容器。它是由无色透明、耐腐蚀、化学性质相同、厚度相等的玻璃制成的，按其厚度分为0.5 cm，1 cm，2 cm，3 cm和5 cm。在可见光区测量吸光度时使用玻璃吸收池，紫外区则使用石英吸收池。使用比色皿时应注意保持清洁、透明，避免磨损透光面。 检测器 检测器的作用是接受从比色皿发出的透射光并转换成电信号进行测量。分为光电管和光电倍增管。 光电管是一个真空或充有少量惰性气体的二极管。阴极是金属做成的半圆筒，内侧涂有光敏物质，阳极为一金属丝。光电管依其对光敏感的波长范围不同分为红敏和紫敏两种。红敏光电管是在阴极表面涂银和氧化铯，适用波长范围为625—1 000nm；紫敏光电管是阴极表面涂锑和铯，适用波长范围为200—625nm。 光电倍增管是由光电管改进而成的，管中有若干个称为倍增极的附加电极。因此，可使光激发的电流得以放大，一个光子约产生106～107个电子。它的灵敏度比光电管高200多倍。适用波长范围为160～700 nm。光电倍增管在现代的分光光度计中被广泛采用。 e．显示装置 显示装置的作用是把放大的信号以吸光度A或透光率T的方式显示或记录下来。分光光度计常用的显示装置是检流计、微安表、数字显示记录仪。 标准曲线定量分析 根据光吸收定律，当波长一定的入射光通过也液层厚度一定的吸收物质溶液时，吸收度与吸光物质的浓度成正比，以吸光度对浓度作图，应得到一条直线。 2、标准曲线的制作 ，y=bx+a 二、对朗伯—比耳定律的偏离 1.非单色光引起的偏离 三、吸光度的测量 选择物质最大吸收波长，选择合适的参比溶液，用来调节仪器零点，消除吸收池及溶剂的影响，消除干扰。 参比溶液选择原则： 试液与显色剂均无色时，可用蒸馏水作参比； 显色剂无色，被测试液存在其它有色离子，可用不加显色剂的被测试液为参比； 显色剂有色，可不加试样的试剂空白为参比； 显色剂和被测离子均有色，可加掩蔽剂掩蔽被测试液为参比。 吸光光度