选修微生物的实验室培养材料.ppt

五、课题成果评价 培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同 （一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。 （三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养基的配制原则： ①目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。 ②营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮比4∶1时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为3∶1时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。 ③pH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。 细菌pH为：6.5-7.5； 放线菌pH为：7.5-8.5； 真菌pH为：5.0-6.0 思考： 1. 获得纯净培养物的关键？ 2. 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？（P15旁栏思考） 3. 消毒和灭菌有何不同？ 4. 常用的消毒和灭菌方法有哪些？ 无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 二.无菌技术 防止外来杂菌的入侵 消毒与灭菌 消毒：指使用较为 方法 仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害 的微生物（不包括芽孢和孢子）。 灭菌：指使用 杀死物体内 外所有微生物，包括 。 灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。 温和的物理或化学 强烈的理化因素 芽孢和孢子 ①煮沸消毒法： ②巴氏消毒法： ③化学药剂消毒法： ④紫外线消毒: ⑴.消毒的方法： 3.常用的消毒与灭菌的方法 100℃煮沸5-6min。 70-75℃下煮30min或 80℃下煮15min。 用75%酒精、新洁尔灭（十二烷基二甲苯苄基溴化铵）等进行皮肤消毒；氯气消毒水源。 表面灭菌和空气灭菌等使用 灭菌法，所用器械是 。照射30min，可先喷洒石炭酸或煤酚皂溶液加强消毒效果。 紫外线 紫外灯 （2）灭菌 a 灼烧灭菌 b 干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌 灼烧灭菌 微生物的接种工具 (接种环、接种针)或其他金属用具直接在火焰的充分燃烧层灼烧 注意适用范围 干热灭菌 160－170℃ ；1－2h 能耐高温的需要保持干燥的物品( 玻璃器皿) 高压蒸汽灭菌 100kPa 121℃ 15-30min 通常用于培养基的灭菌 耐高温需保持干燥的 物品，160～170℃ 1～2小时 接种环、接种针等 金属用具 70~75℃、30min 80℃、15min 100℃、5~6min 消毒 灭菌 定义 方法 较为温和理化方法， 杀死部分有害菌体 （不包括芽孢、孢子） 强烈的理化方法， 杀死所有微生物 （包括芽孢、孢子） 煮沸消毒法 巴氏消毒法 化学药剂 紫外线 灼烧灭菌 干热灭菌 酒精、氯气、石炭酸等 高压蒸汽灭菌 培养基， 100KPa、 121℃、15～30min 二.无菌技术： 防止外来杂菌的污染 1.消毒与灭菌： 分类 定义 方法 灭菌法 杀灭一切微生物 物理法：热力、辐射、微波、等离子体 化学法：醛类、烷化剂 高效消毒法 杀灭一切致病微生物 紫外线、含氯剂、臭氧、复配剂等 中效消毒法 杀灭除芽孢外的致病微生物 超声波、碘类、醇类、酚类 低效消毒法 杀灭细菌繁殖体、亲脂病毒 单链季胺盐、双胍类、中草药、金属离子 无菌技术： 常识 1． 无菌技术包括： （1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行 ； （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行 ； （3）为避免微生物污染，实验操作应在 旁进行； （4）避免已灭菌处理的材料用具与 相接触。 2． 消毒方法： （1）日常生活经常用到的是 消毒法； （2）对一些不耐高温的液体，则使用 消毒法； （3）对接种室或超净工作台首先喷洒 等溶液以增强消毒效果，然后使用 进行物理消毒。 （4）实验操作者的双手使用 进行消毒； （5）饮