2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学案.docVIP

【学习目标】 1、研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。 2．能利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。 【自主学习】 一、研究思路 1.筛选菌株 (1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时 或 其他微生物生长。 (2)选择培养基：在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 和 其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。 （3）配制选择培养基的依据 根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择培养 微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养 的微生物.加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。 2. 统计菌落数目 （1）测定微生物数量的常用方法有 和 。 （2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理 当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。 3.设置对照 设置对照的主要目的是排除实验组中 对实验结果的影响，提高实验结果的 。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养 的培养基作为空白对照。 实验设计 实验设计包括实验方案、 、实施步骤和 等的综合考虑和安排。 (二)实验流程：配制土壤溶液----系列稀释---涂布平板与培养---菌落计数 1. 土壤微生物主要分布在距地表 cm的近中性土壤中,土壤取样时应先 3 cm左右，再取样。 2． 分离不同的微生物采用不同的稀释度，其目的是保证获得菌数在 之间、适于计数的平板。细菌稀释液一般选用 倍进行平板培养，放线菌稀释液为 ，真菌稀释液为 。 3．培养不同微生物往往需要不同培养温度和培养时间。细菌一般在 ℃培养1～2d，放线菌一般在25～28℃培养 d，霉菌一般在 ℃的温度下培养 d。 4．在菌落计数时，每隔 h统计一次菌落数目。选取菌落数目 时的记录作为结果，以防止因培养 而导致遗漏菌落的数目。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出 ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。 5.菌落的特征包括菌落的 等方面。 三、操作提示 1.取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要 。 2.应在 旁称取土壤 g。将称好的土样倒入盛有90mL无菌水的 中，塞好棉塞。 3.在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在 旁进行。 4.实验时要对培养皿作好标记。注明 、培养日期、 等。 四、课题延伸 1.　对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助 的方法。 2.　在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的 将尿素分解成了 。其会使培养基的碱性 ，PH 。因此，我们可以通过检测培养基 变化来判断该化学反应是否发生。 3.　在以 为唯一氮源的培养基中加入 指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变 ，说明该细菌能够 。 【自我检测】 1．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是 ( ) A．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、尿素、琼脂、水 B．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、琼脂、水 C．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、尿素、琼脂、水 D．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、牛肉膏、蛋白胨琼脂、水； 2.某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每克样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL)… ( ) A．2.34×108 B．2.34×109