环境卫生学及管理监测重点.pptVIP

（三）采样方法（棉拭子法、压印法两种） 棉拭子法：用5×5cm的标准灭菌规格版，放在被检物 体表面，用浸有含有相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭 子，在规格板内横竖往返均匀涂抹5次，并随之转动棉 拭子，可连续采样1～4个规格板面积。剪去手接触部 分，并将棉拭子放入装有10ml含相应中和剂的试管 内，立即送检。门把等小型物体则采用棉拭子直接在 物体表面按一定顺序涂抹采样，结果计算用cfu／件表 示。 32 1、步骤（在25cm2规格板内横竖往返均匀涂抹各5次，连 续采4个规格板面积） 33 34 2、检测方法： （1）细菌总数检测：将采样管在混匀器上振荡20s或用 力振打80次，用无菌吸管吸取1.0ml待检样品接种于灭 菌平皿，每一样本接种2个平皿，内加入已溶化的45～ 48℃的营养琼脂15～18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝 固，置36℃±1℃左右温箱培养48h，计算菌落数。 （2）致病菌检测 检测原则：致病菌的检测依据污染情况进行相应 指标的检测 35 （3）计算方法： 细菌菌落总数（cfu/cm2)=平皿上菌落平均数×采 样液稀释倍数/采样面积（cm2) 36 （四）结果判断 标准值 环境类别 范围 菌落总数cfu/cm2 致病菌＊ Ⅰ类 层流洁净手术室、层流洁净病 ≤5 不得检出 房 普通手术室、产房、婴儿室、 Ⅱ类 早产儿室、烧伤病房、 ≤5 不得检出 供应室无菌区 儿科病房、妇产科检查室、注 射室、急诊室、 Ⅲ类 换药室、治疗室、化验室、 ≤10 不得检出 供应室清洁区、 各类普通病房和房间 Ⅳ类 传染病科及病房 ≤15 不得检出 注：＊致病菌指溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌。母婴同室、早产儿室、婴儿室、新 生儿室及儿科病房的物体表面不得检出沙门氏菌。 37 四、使用中消毒液染菌量测定 （一）采样时间：采取更换前使用中的消毒剂与 灭菌器械保存液； （二）采样量及方法：在无菌条件下，用无菌吸 管吸取1.0ml被检样液，加入9.0ml含相应中和 剂的采样管内混匀； 38 （三）检测方法： 1、涂抹法：用无菌吸管吸取1.0ml消毒液，加入9.0ml含 相应中和剂的采样管内混匀，用无菌吸管吸取上述溶 液0.2ml,滴于干燥普通琼脂平板，每份样品同时做2个 平行样，一平行样板置20℃培养7d，观察霉菌生长情 况，另一个平板置37 ℃温箱培养72h，计算菌落数， 同时检测致病菌。 消毒液染菌量（cfu/ml)=每个平板上的菌落数×50 39 2、倾注法：用无菌吸管吸取1.0ml消毒液，加入9.0ml含 相应中和剂的采样管内混匀，分别取0.5ml放入2只灭 菌平皿内，加入已溶化的45℃-48℃的营养琼脂15ml- 18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，一平板置20 ℃ 培养7d,观察霉菌生长情况；另一平板置37℃温箱培养 72h，计数菌落数，同时检测致病菌。 消毒液染菌量（cfu/ml)=每个平板上的菌落数×20 40 （三）结果判断： 使用中消毒液染菌量≤100cfu/ml,不得检 出致病菌；无菌物品保存液应无菌生长。 注意：采样时应无菌操作，正确选用中和剂，采 样后1小时内检测。 41 医院需要常备消毒剂的中和剂 消 毒 剂 中 和 剂 含氯（碘）消毒剂 硫代硫酸钠（0.1%～1.0%) （有效氯或碘0.1%～0.5%) 过氧乙酸溶液（0.1%～0.5%） 硫代硫酸钠（0.1%～0.5%) 过氧化氢溶液（1.0%～3.0%） 硫代硫酸钠（0.5%～1.0%) ①1%双甲酮与0.6%吗啉的混合液 甲醛溶液（1%） ②0.1%～0.5%亚硫酸钠 ③25%氢氧化钠 戊二醛溶液（2%） 甘氨酸（1%）或甲醛（1%） 季按盐类消毒剂 Tween80（0.5%～3.0%)+卵磷脂 （0.1%～0.5%） （1.0%～2.0%） 酚类消毒剂 Tween80（0.5%～3.0%) 碱类消毒剂 等当量酸 酸类消毒剂 等当量酸 酸性氧化电位水 硫代硫酸钠（0.5%)+PBS(0.03mol/L) 42 复方消毒剂 Tween80 +卵磷脂 +硫代硫酸钠 消毒实验用试剂 磷酸盐缓冲液（PBS，0.03mol/L，ph7.2） 无水磷酸氢二钠 2.83g 磷酸二氢钾 1.36g 将各成分加入到1000ml蒸馏水中，待完全溶解后，调ph至7.2-7.4，于121℃ 压力蒸汽灭菌20min备用。 无菌检验用洗脱液 吐温-80 1g 蛋白胨10g 氯化钠 8.5g 将各成分加入到1000ml 0.03mol/LPBS液中，加热溶解后，调