现代组织化学介绍.ppt

* *  现代组织化学        组织化学（Histochemistry） 在保持组织或细胞基本上不改变其生活状态的微细结构的条件下，采用显微镜技术观察某些化学成分或酶活性在组织或细胞内的定性、定位和定量及其变化规律。 现代组织化学 酶组织化学 免疫组织化学 免疫荧光法 免疫酶法 亲合法 免疫金银法(IGSS) 免疫放射自显影法 杂交组织化学 原位杂交 荧光原位杂交 原位PCR 基因芯片 酶组织化学（Enzymohistochemistry） 利用细胞内的酶具有催化底物的特性，并通过显色反应在切片或涂片上显示组织或细胞中内源性酶活性及其定位的方法。 特点：在原位检测；检测酶的活性而不是酶分子本身。 免疫组织化学 利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。其中免疫组化实验中常用单克隆抗体和多克隆抗体。 免疫组化标本主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理大片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。 其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中首选的组织标本制作方法。 免疫组化根据标记物的不同分为免疫荧光法，免疫酶标法，亲和组织化学法。后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性高，有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法最常用。 用途 肿瘤诊断 病原生物体检测 细胞外基质研究 免疫损伤和细胞增殖及凋亡领域的应用 免疫荧光的应用 免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。 以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术。 用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法（常用）；用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。 优点：特异性强、敏感性高、速度快。 缺点：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序比较复杂。 直接法 将标记的特异性荧光抗体，直接加在抗原标本上，经一定的温度和时间的染色，用水洗去未参加反应的多余荧光抗体，室温下干燥后封片、镜检。 间接法 如检查未知抗原，先用已知未标记的特异抗体（第一抗体）与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的抗体，再用标记的抗抗体（第二抗体）与抗原标本反应，使之形成抗原—抗体—抗体复合物，再用水洗去未反应的标记抗体，干燥、封片后镜检。 免疫荧光技术在肾脏疾病诊断中的应用 在肾脏疾病中可根据显现的荧光强度来判断免疫复合物的多少，常用半定量法。 阴性；高倍镜下似乎可见为±；低倍镜下似乎可见，高倍镜下明显可见为+；低倍镜下明显可见，高倍镜下清晰可见为++；低倍镜下清晰可见，高倍镜下耀眼为+++；低倍镜下耀眼，高倍镜下刺眼为++++。 直接免疫荧光法 ： a.含IgG的免疫复合物 b.兔抗人IgG血清 c.荧