肿瘤分子诊断技术说课.ppt

微小残癌的检测( minimal residual disease， MRD) 当恶性肿瘤经过治疗后，有时会有残留的癌细胞 做细胞 FISH的分析，或者使用流式细胞分析 利用外周血液及定量PCR的方法来检测有明确特异性位点的基因突变或染色体重排 检测血中转移的腺癌，鳞状上皮癌等非血液的肿瘤 启动子甲基化的检测 致癌基因启动子的低甲基化 抑癌基因启动子的过度甲基化 利用甲基化 PCR，甲基化定序等方法来检测启动子的甲基化 癌症的形成，也会造成基因剪接的异常， non-coding RNA (如micro RNA) 的变化 利用RT-PCR、real-time qRFPCR， micro RNA array， exon array等来探讨这些变化 Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics * 肿瘤的分子诊断技术 温州医学院检验医学院生命科学学院 癌症的分子诊断 几乎癌组织都是克隆性增殖 患者的所有癌细胞都起源于单一的癌细胞 大多数癌症不能用单基因遗传方式解释 某些类型的癌症，亲属发生同类肿瘤的风险会增加，但不表现孟德尔遗传 许多癌症与环境的物理化学因子或生物因子有关 遗传因素 一些特殊的基因突变会造成特定的癌症 性别 乳腺癌以女性为主 环境因素 石棉、辐射线、抽烟、油烟 压力 持续的工作压力 食品添加剂 亚硝酸的添加 病毒感染 HPV与子宫颈癌 药物 雌激素替代疗法与乳腺癌 生活方式 运动不足和不当饮食 造成癌症的因素列举 细胞周期的调控因素 受细胞周期素及相对应的细胞周期素依赖激酶 (cyclin-dependent kinase，CDK)严格调控 细胞胞周期的每阶段都有一组 CDKs与cyclins 交互作用来调控 CDK的磷酸化及cyc-lin-CDK抑制剂(CKIs)的活化都会影响细胞周期 癌症相关基因 致癌基因(oncogene) 1911年Rous发现的鸡的肿瘤传染因子是一种病毒，为反转录病毒 癌化作用是因為病毒基因组内特殊致癌基因(v-onc) 哺乳类的基因组上，也存在有同源的序列 (e-onc) 调控胚胎的发展、细胞的增殖、分化和凋亡 调控失常，会使细胞发展为恶性表型，正常细胞中具有这样潜能的基因称为原(致)癌基因( proto-oncogene) 原(致)癌基因 调控生长分化、信号传递、转录因子、细胞周期 生长因子 病毒来源的sis基因与细胞来源的原癌基因-血小板衍生性生长因子次单位 细胞表面生长因子受体 表皮生长因子受体基因( epidermal growth factor receptor， EGFR) 集落刺激因子1受体(CSF1R)基因相当， CSF1R是一种促进骨髓中多种细胞分裂的生长因子 细胞内信号传递系统( Intracellular signal transduction systems) RAS家族是信号传递通路G-protein的成份，藉由跨膜蛋白与G-protein的结合将信号传至核内 蛋白质-酪胺酸激酶( protein tyrosine kinase) ABL是细胞内信号传递蛋白与信号传递至核内有关 核内转录因子 MYC是DNA结合蛋白，而JUN是转录因子 细胞周期有关的蛋白 调控细胞周期相关的激酶和激酶抑制物 病毒性癌基因 只有少数人类反转录病毒引起人类癌症 HIV 可以促进细胞增殖和增加体细胞突变的机会，或插入基因组促使邻近基因活化引起免疫缺陷而间接促进肿瘤的产生 病毒癌基因插入宿主癌化的原因 有些的癌基因产物作用如同细胞癌基因产物 有时插入的病毒癌基因是断裂的，這些断裂的序列可能是基因内的调控序列 有些病毒癌基因的产物与细胞癌基因产物共存，可能调节癌蛋白活化 肿瘤抑制基因( tumor suppressor gene) 在遗传学上，癌基因对细胞的作用是显性作用( dominant effect) 可抑制oncogene作用的基因，称tumor suppressor gene 抑癌基因的蛋白產物能抑制细胞不正常生长及抑制细胞癌化 遗传学上一般属于阴性 ( recessive) RB基因 视网膜母细胞瘤( retinoblastoma，RB)，一种侵犯幼儿视网膜膜的肿瘤 散发性非遗传的类型最常见，会造成单侧眼睛病变 约1/3的RB病人产生多发性肿瘤，且常造成双眼的病变，及在同胞兄弟姊妹中可发生同样病变，家族倾向遗传性  RB基因的功能 蛋白产物pRb是细胞周期的刹车器 pRb 蛋白发生周期性的磷酸化反应 pRb蛋白在GI期是细胞周期抑制信号的集合点，这个以pRb蛋白为中心的抑制传导途径，称为RB传导途径 静止的细胞， pRb没有磷酸化 Gl期之末，在有丝分裂时间是磷酸化的 非