第二章__昆虫解毒代谢详解.ppt

1.前言 2. 初级代谢 (1) 氧化代谢（MFO) (2) 非氧化代谢 I.水解代谢（酯酶） II.还原代谢（硝基还原酶） 3. 次级代谢 4. 有毒物质在昆虫体内代谢 第一节 前言 一、研究昆虫解毒代谢的意义 二、昆虫对毒物的代谢 I. 解毒作用：有毒物质进入昆虫体内，昆虫体内有多种防御机能，能将有毒物质迅速代谢为无毒物质，使机体保持正常状态而不受其害，这种代谢称为解毒作用。 II. 活化作用：有些化合物在生物体内，经代谢转化成比原化合物更毒的物质，这种代谢称为活化作用。 第二节 氧化代谢（MFO) 氧化代谢中所涉及到的酶系很多，主要有：脱氯化氢酶（deyudrochlorinase）、微粒体多功能氧化酶（microsomal mixed-function oxidases，MFO）、谷胱甘肽转移酶（glutathione-transferases，GST）及各种酯酶（esterases）等。其中微粒体多功能氧化酶具有底物广谱性的特点，能参与对各种杀虫剂（包括有机氯、有机磷、氨基甲酸酯、拟除虫菊酯、化学不育等等）及有毒物质的解毒作用，在有毒物质代谢中起着非常重要的作用。 一、微粒体多功能氧化酶作用方式及机理 (一)微粒体多功能氧化酶研究历史 1. 1943年Claude把通过差速离心分离出来的亚细胞颗粒（直径约200μm）称之为微粒体。 2. 1954年Axelrod首先发现兔肝微粒体对苯异丙胺具有脱氨氧化作用，此后人们才开始注意到微粒体在氧化代谢中的重要作用。 3. 1958年，Brodie等证明了离体的微粒体氧化酶要起作用，需要氧和还原性辅酶Ⅱ（NADPH） 4. 昆虫中的微粒体氧化酶是Agosin等于1961年首次在德国蜚蠊中发现的。 （二）微粒体多功能氧化酶的组成及性质 MFO是一个酶的复合体，主要包括：细胞色素P450、黄素蛋白-NADPH-P450还原酶、细胞色素b5、黄素蛋白-NADH-细胞色素b5还原酶和磷脂等成分组成。 1.细胞色素P450的特性 (1)光学特性 微粒体被还原后可以与CO结合形成复合体，通过双光束扫描分光光度计扫描，在波长450nm处出现一个最大吸收峰。除了与CO结合外，细胞色素P450可以与许多物质结合，结合后所诱导产生的光谱，按其性质可分为三类：Ⅰ型：波峰在390-410，波谷在425-435nm； Ⅱ型：波峰在425-435nm，波谷在390-410nm； MⅡ型：最大和最小吸收峰分别在325和420nm 。 棉铃虫中肠细胞色素P450 CO 差光谱图 (2)不稳定性 (4)多样性 P450基因已经有35亿年的历史。 现在所有的p450s均来自一个共同的古老的基因。 现在认为当前p450 超家族是通过基因扩增或基因适应多样化形成的。 P450基因属于基因超家族(superfamily)，目前已知，该超家族包括70个家族(family)，120个亚家族(sub-family)（Nelson,1998），并且不断有新的成员加入，其数量增长很快。 (5) 可诱导性 现已证明，许多化合物，如药物、杀虫剂、以及植物他感化和物都能诱导P450的生物合成。目前搞的比较清楚的是苯巴比妥和3-甲基胆蒽可诱导P450的合成。 2. 细胞色素P450酶系氧化底物循环作用机理 (1) 底物与酶结合，酶上的铁原子由于NADPH-细胞色素P450还原酶供给一个电子使得三价铁还原为二价铁。 (2) 铁的还原作用使其与分子氧结合。 (3) 另一个电子和质子加到铁上形成FeOOH复合体。 (4) 失去一分子水后形成（FeO）3+复合体，此复合体将其氧原子转移到底物上。 (5) 被氧化的底物释放出来，游离的细胞色素P450又重复下一个循环。 Monooxygenation reactions catalysed by cytochrome P450 Monooxygenation reactions catalysed by cytochrome P450 Monooxygenation reactions catalysed by cytochrome P450 P450对底物的氧化循环机理 二、多功能氧化酶作用方式 O、S和N-烷基的羟基化作用 脂族羟基化作用和环氧化作用 芳香族羟基化作用 有机磷酸酯的脂族氧化作用 氮和硫醚的氧化作用 Monooxygenation reactions catalysed by cytochrome P450 1. O、S和N-烷基的羟基化作用（西维因的N-烷基羟基化作用） O、S和N-烷基的羟基化作用（西维