细菌染色法介绍.ppt

* 实训三细菌染色法 * 一、实训目的 学习微生物涂片、染色的基本技术。 掌握细菌革兰染色方法及其结果判断。 熟悉革兰染色法的实际意义。 学习无菌操作技术，巩固油镜的使用方法。 * 染色目的 ①细菌细胞与背景形成鲜明的色差，在显微镜下更易于识别。 ②鉴别细菌 染色方法 ①单染色：用于观察细菌大小及形态； ②复染色/革兰染色：用于鉴别细菌，指导临床合理用药； ③其他方法：负染色、银染色等 二、实训原理 * 常用染料 ①碱性染料：带正电荷，如美兰、结晶紫、番红等； ②酸性染料：带负电荷，如伊红、酸性复红等； ③中性染料：如基姆萨氏（Gimsa）染料（伊红天青）、伊红美兰等 二、实训原理 * ※G+细胞壁结构较致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易透入； G-细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄，含大量脂质，乙醇易渗入。※G+等电点（pI 2～3）比G-（pI 4～5）低，在相同pH条件下， G+所带负电荷比G-多，故与带正电荷的碱性染料结晶紫结合牢固，不易脱色。※G+菌体含大量核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫牢固结合，使已着色的细菌不被乙醇脱色； G-菌体含核糖核酸镁盐很少，故易被脱色。 二、实训原理－ Gram’s染色原理 * 三、实训过程 单染色法 菌种：枯草芽胞杆菌 * 涂片 干燥 固定 结晶紫 1min 镜检 水洗 干燥 记录结果 教师评分 无菌操作 两环菌液 直径约1cm 晾干 烘干 等全干 过外焰3次 目的 不烫 染液不干 全干再看 用油镜 * 三、实训过程 复染色法－革兰染色法 菌种 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 * 涂片、干燥、固定 初染－结晶紫 媒染－碘液 脱色－95%酒精 复染－复红 油镜镜检 ① ③ ② 三、实训过程 * 涂片 干燥 固定 结晶紫 50s 碘液 1min 水洗 95％乙醇 25s 水洗 复红 2min 水洗 镜检 水洗 干燥 * 涂片过程的无菌操作 * G+（紫）×1000 G— （红）×1000 革兰染色意义:鉴别；致病性；药物选择 * 革兰染色影响因素： 涂片厚度—宜薄不宜厚 菌 龄—培养18-24小时的幼龄菌 各试剂作用时间 脱色时间—关键步骤，一般30秒 过长— 假阴性？ 过短— 假阳性？ * 实训结果:油镜下观察结果 评分标准： 1.找到目标 2.是否最佳目标 3.目标是否清晰 4.光线是否适宜 玻片名称 染色方法 物象总放大倍数 物象形态（绘图） 结论 得分 ① ②