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第五章 血痕检验 王伯平 武汉大学医学院法医教研室 血痕的概念：血液在体外干燥后所形成的斑迹，称为血痕（Bloodstains）。 血痕与血液是有区别的，血痕中红细胞被破坏，而血液中红细胞完整；血液中能检测的血型不一定能在血痕中检测出来。 血痕检验时应注意节省检材，一般情况，应保留2/3以上以备复核鉴定。 血痕检验的目的（1）是否是血；（2）是否是人血；（3）血痕的个人识别；（4）与案情有关的问题。 血痕检验的一般程序 第一节 肉眼检验 一、血痕的部位 二、血痕的颜色 三、血痕的形状 1、滴状 形状决定于高度和方向。 2、流注状 多由静脉出血引起。 3、喷溅状 多由动脉出血引起。 4、擦拭状 特点是面积加大、浓淡不一、境界不清、平行线条状 二、血痕的形状 5、血印痕 血手印、血足印、血鞋印是案件侦破的重要线索和证据。 6、血泊 血泊多为原始现场 7、血水 应仔细检查卫生间、洗手间有无血水 8、隐性血痕 9、其他 四、血痕的范围、搜寻和提取 血痕的范围取决于出血量，根据血痕的大小可估计出血量。 血痕在提取前，应拍照，提取时，应带手套，切不可用手拿检材，避免受污染检材。 第二节 预试验 要求： （ 1）是血痕一定呈阳性 （2）所需检材量少，灵敏度高 （3）操作简便 （4）快速 预试验的特点是：灵敏度高、特异性不高。 一、联苯胺试验 1、原理 血红蛋白或正铁血红素的过氧化物酶活性能催化过氧化氢释放新生态氧，氧能使无色的联苯胺氧化成蓝色的联苯胺蓝。 2、试剂 3、操作步骤 注意试剂添加顺序不能颠倒 4、注意事项 二、鲁米诺试验 1、原理 血红蛋白的过氧化物酶活性能使过氧化氢释放新生态氧，氧能使不发光的鲁米诺氧化而发出荧光。 2、试剂 鲁米诺0.1g，无水碳酸钠5g，30%过氧化氢15ml，蒸馏水100ml，混合后溶解。 3、操作 将试剂装入喷雾瓶，在暗室内喷射。如是血痕则发强荧光。 注意事项; 1、鲁米诺容易氧化，应临用时配置。 2、适合于光线暗的地方寻找血痕。 3、此法多血痕检验影响小，但多次喷射仍会对血痕检验有影响。 4、此方法灵敏度高，特异性不高。 第三节 确证试验 预试验只能说明可能是血，但不能肯定是血。可通过确证试验来确定是否是血痕。 确证试验的方法有：血色原结晶试验、氯化血红素结晶试验、血细胞检查等。 血色原结晶试验 1、原理 血红蛋白在碱性溶液中分解成正铁血红素和变性珠蛋白，在还原剂的作用下，正铁血红素还原成血红素，血红素与变性珠蛋白及其他含氮化合物结合，生成具有特殊吸收光谱的血色原结晶。 2、试剂 最好是配置后第二天使用 3、操作 4、注意事项 (1)用新鲜试剂 （2）可在酒精灯上稍微加热 （3）血痕量少或被细菌污染，不形成结晶时可进行吸收光谱检查。 （4）此结晶为血痕所独有，出现此结晶可判定含有血痕。 (5)此实验灵敏度不高，阴性不能排除是血痕。 （6）如采用具有种属特异性和器官特异性的抗人血红蛋白沉淀试验，此步骤可省略。 第四节 种属鉴定 主要有三种方法： 一、免疫学方法 （1）沉淀反应 （2）胶体金试剂条 （3）ELASA法 二、生物化学方法 等电聚焦电泳 三、DNA分析检测遗传标记 一、免疫学方法 1、沉淀反应 原理：可溶性抗原与相应抗体在适当电解质条件下发生特异性结合，经过一段时间后形成肉眼可见的抗原抗体复合物沉淀。 沉淀反应要求抗原抗体的比例要适当。抗原或抗体过多，会影响沉淀出现。另外还要注意其他的影响因素。 操作方法 （1）浸泡检材，上清液呈淡黄色时可进行下步试验。 （2）取抗血清0.1ml加入沉淀管，然后取血痕浸液0.2ml缓慢加入沉淀管，两液面要清晰。 （3）静置沉淀管，5‘、15’、30’、60’观察一次。60’不出现沉淀环为阴性。 2、胶体金试剂条 原理 胶体金分子呈球形，能吸附蛋白质，用抗人血红蛋白单克隆抗体包被的胶体金分子，可形成布满抗人血红蛋白单克隆抗体的球形胶体金微粒。 胶体金试剂条采用了免疫学抗原抗体特异性反应原理和层析技术原理，在加样后，由于吸附作用浸泡液向加样区的另一侧移动，如浸泡液中含有人血红蛋白，则与抗人血红蛋白胶体金微粒结合形成人血红蛋白-抗人血红蛋白胶体金微粒的复合物，复合物继续向另一侧移动，当遇到抗血红蛋白抗体时（检测线），人血红蛋白-抗人血红蛋白胶体金微粒复合物中的血红蛋白与检测线上的抗血红蛋白抗体产生抗原抗体反应，则停留于此，浓度逐渐增高，形成肉眼可见的红色反应线。部分