第五章核酸化学研讨.ppt

第五章 核酸化学 第一节 概述 一、染色体、基因和DNA 二、核酸的化学组成 一、染色体、基因和DNA 1 ．染色体和基因― 遗传的基本单位 染色体是细胞核内能被碱性染料着色的物质的螺旋集缩体，由核酸、组蛋白、非组蛋白等组成。染色体是遗传信息的载体，是细胞中主宰遗传的结构。基因存在于染色体上，基因在遗传中具有完整性和独立性，随染色体的分离、配对而进行独立的分配。 一、染色体、基因和DNA 2 ．核酸― 遗传信息的载体 基因是核酸的一些组成部分或结构区域，即基因存在于核酸分子上，所以核酸是遗传变异的物质基础，是遗传信息的载体。生物体的遗传、变异、生长发育、细胞分化等都与核酸密切相关。 二、核酸的化学组成 二、核酸的化学组成 4 ．核苷酸― 核酸的基本结构单位 (1)碱基与戊糖的连接 碱基与戊糖连接形成核苷，其连接键是由戊糖的半缩醛羟基缩合而成的糖苷键，称N -苷键。 第二节 核酸的结构 一、核酸的一级结构 二、核酸的高级结构 二、核酸的高级结构 1 . DNA 的二级结构― 双螺旋结构模型 2 . tRNA 二级结构― 三叶草结构模型 3 . DNA 三级结构― 超螺旋 ② 碱基配对：两条核苷酸链依靠碱基之间形成的氢键而结合在一起。碱基中A与T、G与C配对，这种配对关系，称为碱基互补配对规则，所以A+G=T+C。 3 . DNA 三级结构― 超螺旋 第三节 核酸的性质及纯度测定 一、核酸的溶解性 二、核酸的解离 三、紫外吸收 四、变性与复性 五、核酸的含量与纯度测定 六、核酸碱基序列的测定 第四节 核酸的生物功能 一、DNA 的复制与生物遗传信息的储存 二、RNA 是生物遗传信息表达的媒介 三、生物遗传变异的化学本质 四、核酸的催化性质  3 ．核酸与蛋白质的生物合成关系 第五节 核酸化学中的几种重要技术 一、核酸的分子杂交技术 二、PCR 技术 三、基因定点突变技术 四、定向分子进化 核酸的杂交 2 . tRNA 二级结构― 三叶草结构模型 tRNA的二级结构都呈” 三叶草” 形状，在结构上具有某些共同之处，一般可将其分为四臂四环：包括氨基酸臂、反密码环、二氢尿嘧啶环、T?C环和额外环（可变区）。 U C A U G A U U A A A U 亮氨酸 A C U 天门冬 氨酸 A U G 异亮氨酸 肽键 反密码 DNA 的三级结构是指双螺旋基础上分子的进一步扭曲或再次螺旋所形成的构象。 1、线状：如真核细胞中，+组蛋白→染色体 2、环状：原核细胞中及线粒体、叶绿体中 一、核酸的溶解性 1 ．溶解性: ―碱基、核苷酸和核酸具有不同的溶解性 DNA 和RNA 都是极性化合物，一般都微溶于水，不溶于乙醇、乙醚等有机溶剂。 一、核酸的溶解性 2 . 0.14 摩尔法 DNA和RNA核酸蛋白在水中的溶解度受盐浓度的影响不同。DNA 蛋白在0.14mol / L 的NaCI 溶液中溶解度最低。RNA 蛋白在5mol / L以上 的NaCI 溶液溶解度最低。 因此，在核酸分离提取时，常用不同浓度的 NaCI 溶液条件来分别提取DNA 蛋白和RNA 蛋白，然后用蛋白质变性剂去除蛋白质，即得纯的DNA 或RNA 。此法就称为0.14 摩尔法。 二、核酸的解离 1 ．多价解离― 体内DNA呈多阴离子态 由于DNA 分子内碱基通过形成氢键而配对，使可解离的碱基减少，相对增强磷酸基的解离，因而可把DNA 看成是酸性较强的多元酸。 2 ．带电性― 核酸和核苷酸可用离子交换分离 由于核酸、核苷酸是两性电解质，在一定pH条件下各解离基团的解离情况各不相同，使核酸、核苷酸带一定种类和数量的电荷，因而可用离子交换法对核酸、核苷酸进行分离。 三、紫外吸收 1 ．紫外吸收― 由碱基的共轭体系决定 核酸分子的碱基都含有共轭双键，具有吸收紫外线特征，测定时，一般选用260nm波长。 2 ．定量测定― 核酸和核苷酸测定的基本方法 用下式求出核苷酸百分含量： 式中，M为核苷酸相对分子质量；ε260为在260nm 处的吸收系数；C 为样品浓度，mg / mL ； A260为样品在260nm 波长下的吸光度值 . 四、变性与复性 1 . DNA 变性― DNA 生物功能实现所必需 DNA 受到某些理化因素的影响，分子中的氢键、碱基堆积力等被破坏，双螺旋结构解体，分子由双链为单链的过程称为变性。变性的实质是双螺旋结构被破坏，但DN