第十一章核苷酸代谢研讨.ppt

第十一章 核苷酸代谢 核 酸 酶 （1）根据对底物的专一性分为 核酸酶的作用特点 内切核酸酶对RNA的水解位点示意图 限制性内切酶类型 I型：分子量大于105，多亚基，需S-线苷蛋氨酸、ATP和Mg2+ ，识别位点与切割位点相差甚远，产物为异质，是限制与修饰相排斥的多功能酶。 Ⅱ型：分子量小于105，需Mg2+ ，切割位点位于识别位点上，产物为专一性片段，不具修饰酶功能。现在分子生物学研究所用的限制性内切酶均为此类。 ⅡI型：识别位点为5-7bp的非对称序列 ，切割位点在顺序之外离识别序列5-10bp，切割双链，个别也切割单链。是限制与修饰相多功能酶。 限制性内切酶的命名和意义 例：Eco R I，这是从大肠杆菌（Ecoli）R菌珠中分离出的一种限制性内切酶 嘌呤核苷酸合成补救途径 嘧啶核苷酸从头合成途径 与嘌呤合成不同，嘧啶的合成是先合成尿嘧啶环，再分别与核糖和磷酸结合形成尿嘧啶核苷酸，再转变成其他核苷酸。 见P240 嘧啶核苷酸补救合成途径 五 脱氧核苷酸的合成 * * 第一节 核酸的酶促降解 生物体内普遍存在着水解核酸的酶系，核酸的酶促降解如下： 核酸 核苷酸 核苷 碱基+戊糖-1-P 核酸酶 核苷酸酶 核苷磷酸化酶 核糖核酸酶(RNase) 脱氧核糖核酸酶(DNase) 非特异性核酸酶 （2）根据切割位点分为 核酸内切酶 核酸外切酶 外切核酸酶对核酸的水解位点 p p p p p p B B B B B B OH 5′ 牛脾磷酸二酯酶 （ 5′端外切5得3） 蛇毒磷酸二酯酶 （ 3′端外切3得5） 5′ p p p p OH Py Pu Py Py 1′ p p p G A C U p p p G A 3′ RNAase I RNAase T1 Pu ：嘌呤 Py：嘧啶 限制性内切酶 原核生物中存在着一类能识别外源DNA双螺旋中4-8个碱基对所组成的特异的具有二重旋转对称性的回文序列，并在此序列的某位点水解DNA双螺旋链，产生粘性末端或平末端，这类酶称为限制性内切酶。 常用的DNA限制性内切酶的专一性 辨认的序列和切口 说明 ‥ ‥A G C T ‥‥ ‥ ‥T C G A ‥ ‥ ‥G G A T C C ‥‥ ‥ ‥C C T A G G ‥‥ ‥ ‥A G A T C T ‥‥ ‥ ‥T C T A G A ‥ ‥G A A T T C ‥‥ ‥ ‥C T T A A G ‥‥ ‥ ‥A A G C T T‥‥ ‥ ‥T T C G A A ‥‥ 六核苷酸，粘端切口 ‥ ‥C C C G G G ‥‥ ‥ ‥G G G C C C ‥‥ 四核苷酸，平端切口 四核苷酸，平端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口 Eco R I 属名 种名 株名 序号 限制性内切酶是分析染色体结构、制作DNA限制图谱、进行DNA序列测定和基因分离、基因体外重组等研究中不可缺少的工具。 第二节　 嘌呤和嘧啶的分解代谢 一、嘌呤的分解代谢 不同种类的生物分解嘌呤的能力不同，因此嘌呤分解代谢的产物亦各异。动物的肝脏，肾脏和小肠中黄嘌呤氧化酶活力很高，因此嘌呤的分解代谢主要在肝脏，小肠粘膜，肾脏中进行。 核苷酸 核苷 碱基+（脱氧）戊糖-1-P 核苷酸酶 核苷磷酸化酶 磷酸 一、嘌呤的降解 嘌呤的分解在核苷酸，核苷和碱基水平上均可发生。 研究发现，体内腺嘌呤的分解主要是在腺苷脱氨酶和腺苷酸脱氨酶作用下进行的。 鸟嘌呤的分解则是在鸟嘌呤脱氨酶作用下进行的。 嘌呤的分解首先是脱氨基。 尿酸是人类嘌呤类化合物分解代谢的最终产物。在正常身体条件下，血液中尿酸含量为20—60mg/L，超过80mg/L后，因为尿酸的溶解度很低，其Na盐和K盐易形成结晶沉积于软组织，软骨及关节处，形成尿酸结石及关节炎（由尿酸盐结晶形成的关节炎称痛风症）；此外，尿酸盐沉积也在肾上发生，成为肾结石。而治疗痛风病的药物别嘌呤醇是次黄嘌呤的类似物，可与次黄嘌呤竞争黄嘌呤氧化酶的结合部位；别嘌呤醇的氧化产物又是黄嘌呤的类似物，进一步与次黄嘌呤竞争黄嘌呤氧化酶的活性中心，从而抑制该酶活性，减少尿酸生成不能形成结石，达到治疗目的。 二、嘧啶的降解 嘧啶的分解代谢过程与嘌呤分解相似，包括脱氨基作用，氧化，还原，水解和脱氨基作用等。在哺乳动物中，嘧啶的分解代谢主要发生在肝脏，其代谢过程见P234，水解生成CO2，NH3，β-丙氨酸，β-氨基异丁酸。后者脱氨基后进入有机酸代谢或直接排出。 第三节 核苷酸的生物合成 一、核甘酸生物合