第章RNA的生物合成介绍.ppt

RNA的生物合成 生物化学与分子生物学教研室 刘先俊 一、RNA聚合酶 RNA聚合酶——依赖DNA的RNA聚合酶（DNA-dependent RNA, polymerase,DDRP） 以DNA为模板，催化2个游离的NTP形成3’，5’-磷酸二酯键。 1.原核生物RNA聚合酶（大肠杆菌） （1）全酶(holoenzyme) 由4种(5个)亚基α2ββ’σ组成 （2）核心酶(core enzyme) α2ββ’ ，参与转录的全过程 （3）σ亚基 亦称σ因子（σ factor)—转录辅助因子 识别启动子，不参与转录过程 2.真核生物RNA聚合酶 类型 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 模板链：反意义链（antisense，(-)链）—— 以该链中的DNA碱基顺序指导RNA的合成即被转录的那条DNA链。 5’-----GCAGTACATGTC-----3’编码链 DNA 3’-----CGTCATGTACAG-----5’模板链 5’-----GCAGUACAUGUC-----3’ mRNA N ------Ala--Val--His--Val------C 蛋白质 不对称转录 1.DNA双链上，一股链可转录，另一股不转录。2.模板链与编码链并非固定不变。3.转录方向都是5’ 3’ (一）启动子（promoter） 转录开始时能与RNA全酶结合的DNA顺序（双链）1、原核生物启动子的特点:(1)DNA序列在转录起始点的5’端区(上游区)(2)-10bp处 保守序列(3)-35bp处 -TTGACA- 在DNA的转录起始部位，被转录的第一个核苷酸，通常为+1(一般是嘌呤核苷酸A或G)，其后分别为+2，……等(即下游)。在+1前面的依次为-1、-2……等(即上游)。它们都是针对编码链而定的。 二、tRNA的加工修饰1．前体tRNA分子的剪切和剪接： 三、rRNA转录后的加工 真核生物rRNA的基因 (rDNA) 转录产物 成簇纵列串联排列 重复序列DNA 核质:--不需加工 5s rRNA 核仁:--加工 5.8s rRNA 28s rRNA 18s rRNA 几种主要的加工方式： 1. 剪接(splicing) 2. 剪切(cleavage) 3. 修饰(modification) （一）真核前体mRNA的加工 核内的初级mRNA称为核内不均一RNA或杂化核RNA(heteronuclear RNA, hnRNA)。 1. 5’-末端加入“帽”结构 7-甲基鸟嘌呤核苷酸残基 2．3′-末端“加尾”： 绝大多数真核生物mRNA的3′-末端都有一长串的腺苷酸，通常称之为多聚A尾巴（polyA tail），其长度约为100～300个核苷酸。 3．mRNA的剪接： 1）断裂基因(splite gene) 真核生物结构基因，由若干个编码区和非编码区互相间隔开但又连续镶嵌而成，去除非编码区再连接后，可翻译出由连续氨基酸组成的完整蛋白质，这些基因称为断裂基因。 2）外显子(exon)和内含子(intron) 4．内部碱基或核糖的修饰： 部位 胞浆与细胞核内 主要方式 甲基化 位置 核糖的2′-OH位上 或嘌呤碱基上 修饰后统称为修饰碱基。但mRNA分子中的修饰碱基并不太多。 5、RNA编辑（RNA editing） 转录后，对mRNA进行添加、去除或置换核苷酸，从而改变来自DNA模板的遗传信息、翻译生成不同于DNA所规定的氨基酸序列。 2．添加或暴露3′端的-CCA结构： 成熟tRNA分子的3′末端都有一个CCA-OH的结构。 1）前体tRNA分子内部即存在CCA，它是tRNA基因编码的，经酶切后暴露其CCA—OH。 2）通过tRNA核苷酸基转移酶（tRNA nucleotidyl transferases），以ATP和CTP为原料。真核和部分原核生物即以这种方式形成3′端的-CCA结构。 3. 稀有碱基的生成 稀有碱基的形成可发生在成熟tRNA分子中，但大多数是发生在转录后的加工修饰阶段。由特定的酶催化完成。 主要方式： 1）甲基化：甲基化碱基 2）核苷内部的转位反应：假尿嘧啶 3）还原反应：二氢尿嘧啶 4）脱氨反应：I * * 转录(transcription)： 以DNA单链为模板，NTP为原料，在DNA依赖的RNA聚合酶催化下合成RNA链的过程。 转录 RNA DNA 核心酶 (core