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第二讲 细胞工程 考点导航 1举例说明植物的组织培养 2简述动物的细胞培养与体细胞克隆 3解释细胞融合与单克隆抗体 知识网络 考点梳理 （一）植物细胞工程 1原理：细胞全能性 全能性表达的难易程度：植物细胞动物细胞（动物细胞只有细胞核具有全能性）；受精卵生殖细胞（配子、精子、卵细胞）体细胞； 幼嫩的细胞衰老的细胞。在体细胞中：分化程度低的分化程度高的 ，细胞分裂能力强的细胞分裂能力弱的。 2基本技术：植物组织培养技术，植物体细杂交技术。 （1）植物组织培养技术 ① 过程： 或细胞 脱分化：高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程 再分化：愈伤组织继续培养，重新分化成根或芽等器官的过程 愈伤组织：排列疏松、无规则，高度液泡化的无定型状态的薄壁细胞 ② 培养基的成分：（半）固体培养基，主要是矿质元素、蔗糖、维生素、植物激素等。 ③ 特点： 外植体的选择：花和幼嫩的组织脱分化较为容易，而植物的茎、叶和成熟的老组织则较难。另外制备外植体时应选取有形成层的部分，因为形成层细胞易脱分化。 严格的无菌条件：培养基上有细菌等微生物存在时，它们比植物细胞生长、繁殖得更快，而且它们会产生毒素，使培养的植物细胞很快中毒死亡。因此在培养过程中要求进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作。 完全的营养条件：离体的植物细胞失去了植物的自养能力，所以需要为其提供包括水、有机营养、矿质营养、维生素等营养物质。 光照：离体的植物细胞、组织和器官脱分化形成愈伤组织时，需避光处理；而愈伤组织再分化形成植物幼苗时，需光照处理。 激素调控：生长素含量高于细胞分裂素时，主要诱导植物组织脱分化和根原基的形成；当细胞分裂素的效应高于生长素时，主要诱导植物组织再分化和芽原基的形成。 ④ 地位：是培育转基因植物、植物体细胞杂交培育植物新品种的最后一道工序。 （2） 植物体细胞杂交技术 ① 原理：细胞膜的流动性、植物细胞的全能性 ② 过程 关键环节： A用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，获得有活力的原生质体； 原生质体间的融合： 融合方法：物理法（离心、振动、 电激） 化学法（聚乙二醇PEG） ③ 植物细胞杂交与传统细胞杂交比较： ? 传统杂交 细胞杂交 依据 杂种优势 细胞全能性、原生质体融合 过程 自然发生，在母体完成胚发育 人工诱导融合，需组织培养 本质 精、卵两种生殖细胞结合，完成遗传物质的重新组合 不同生物的体细胞融合，完成遗传物质的融合 优点 杂种第一代生长整齐、植株健壮、产量高、抗虫抗病能力强 克服远源杂交不亲和障碍，实现不同种间的杂交 缺点 存在生殖隔离；杂种第二代会出现生长不齐、产量下降等现象 很多理论、技术问题未解决，距离推广应用有一定差距 目的 获得杂种优势，提高产量 获得优良性状 应用范围 种内 种内、种间均可 ? 3植物细胞工程的实际应用： （1）植物繁殖的新途径： ① 植物体快速繁殖 ② 作物脱毒：取植物分生区附近，如茎尖、根尖，因很少被病毒感染，甚至无病毒，而被用来培育无病毒植株。 ③ 制作人工种子：利胚状体 + 人工种皮 ④ 单倍体育种：大大缩短了育种年限。（二）动物细胞工程 1 动物细胞培养 （1）原理：细胞增殖 （2）过程： （3）培养液的成分：液体培养基，包括无机盐、葡萄糖、维生素、氨基酸、动物血清 （4）动物细胞生长特点：贴壁生长和接触抑制 2动物体细胞核移植技术和克隆动物 （1）选用去核卵(母)细胞的原因：卵(母)细胞比较大，容易操作；含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。 （2）哺乳动物核移植：胚胎细胞核移植和体细胞核移植体 胚胎移植： 动物排卵体外受精胚胎母牛子宫试管牛 （激素处理） （激素处理） 核移植：克隆动物如：多利 3动物细胞融合（单克隆抗体） （1）概念：动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。 （2）技术原理： 1）单个B淋巴细胞产生单一抗体（但不能无限增殖） 2）肿瘤细胞能无限增殖（但不能分泌单一抗体） 3）细胞融合技术杂交瘤细胞（既无限增殖又分泌单一抗体） 4）动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞（获取大量单克隆抗体） （3）过程： a关键环节： 用胰蛋白酶使细胞分散开再诱导融合 b融合方法：除应用植物细胞杂交手段外，再加灭活的仙台病毒 (三) 植物组织培养和动物细胞培养的比较 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 培养原理 细胞全能性 细胞增殖 培养 基 物理性质 固体 液体 化学成分 营养物质、激素 营养物质、动物血清 培养材料 常用植物幼嫩部位或花药 常用