戊型肝炎病毒在家禽、家畜中的流行及其ORF3蛋白人肝细胞蛋白相互作用的研究.pdf

仍需进一步研究。 2．HEV ORF3蛋白与肝细胞蛋白相互作用的研究 本研究以基因l型和4型HEvOI讧3蛋白为诱饵，通过酵母配对杂交实验对人 肝cDNA文库进行筛选，筛选结果应用酵母杂交共转化实验进行验证。经过三次实 验，筛选出了32种与oRF3蛋白有相互作用的肝细胞蛋白。其中4种蛋白(4／32， 12．5％)已经有报告能够与ORF3蛋白结合。进一步应用哺乳动物细胞内化学发光 免疫共沉淀实验对酵母杂交实验的筛选结果的可靠性进行评估，显示筛选结果的可 信度比较高。 生物信息学分析发现这32种相互作用蛋白在细胞核、细胞质、细胞膜、细胞外 基质、以及线粒体、内涵体膜中均有分布，大多数蛋白定位于细胞的多个部位。这 些蛋白分别参与细胞代谢、细胞免疫、细胞黏附等多个生物学过程。因此推测ORF3 蛋白可能通过与这些蛋白相互作用，发挥多重作用。通过对蛋白功能富集聚类分析， 发现分别有显著多数量的相互作用蛋白参与血液凝固、氧化应激和铁代谢过程。结 合戊型肝炎临床表现和肝组织的病理特征进行分析，推测oRF3可能通过与宿主细 胞蛋白的相互作用，影响凝血、脂质代谢以及铁代谢，而引发相应的病理过程。 HEv ORF3蛋白与以基因4型和1型HEVORF3为诱饵筛选到的这32种人肝细胞 蛋白是否有相互作用。结果显示，基因l型、4型和兔HEV的OI冲3蛋白都能够与 这些蛋白结合，然而禽HEv的ORF3蛋白只与其中的13种蛋白有相互作用。因此， 禽HEv对人肝细胞的影响作用可能不同于哺乳动物HEV，这种蛋白相互作用的差 别是否与禽HEv与哺乳动物HEV宿主范围等的差别有关联，还需要进一步研究。 这些发现为我们进一步研究ORF3蛋白的致病作用，以及研究HEV感染、复 制和宿主限制性的分子机制提供了线索和方向。 酵母双 关键词：戊型肝炎病毒 HEV．抗原HEv-抗体HEVORF3蛋白 杂交实验蛋白质相互作用 免疫共沉淀实验 2 Abstl·act E causatiVeof all H印atitisvims(HEV)，meagenth印atitisE，is importalltpublic healmconcenlm evidencesindicatetllat Eisa mallycountries．Accumulating hepatitis zoonotic meaIlsmattheHEl矿villIsexistsinnatural disease，whiCh aIlimalreseⅣoirs． HEV infIectionis1(110wnt0bee11demiciIl of China．hlcreasingDeportssporadic EcaSesare relatedt0animal themolecular h印atitis likely origins．Fullyunderstallding ofHEVinaIlimalsis forthe a11d pre、，alence si鲥ficant control of important preVention E．IIlthis collectedailimalsemm f硒m hepatitis di行．erent