短柄五加黄酮类化合物的提取工艺概述.ppt

短柄五加黄酮类化合物的提取工艺 完成人：王汉伟 赵小瑞 杨娜 黄酮类化合物广泛存在于植物体中，具有抑菌消炎、抗氧化、抗衰老、抗癌防癌、抗病毒等诸多功效，有着广阔的市场前景。 五加科植物大都含有黄酮类化合物，目前国内外对短柄五加的有效成分的分离鉴定及开发应用报道不多，且作为陇东子午岭的一种特色植物，对其的有效成分的研究还很少。本研究对短柄五加果实中黄酮类化合物进行提取分离，并进行了定性分析和定量测定，旨在为短柄五加果实中的黄酮类化合物的进一步研究和利用奠定基础，并为短柄五加的开发利用提供理论依据。 一、材料与方法 1.1 材料：短柄五加果实 1.2 仪器、药品 ：索氏提取器、恒温水浴锅、分光光度计、电热恒温鼓风干燥箱、精密电子天平；芦丁、乙醇、石油醚、乙醚、硼氢化钠、水杨酸、过氧化氢、FeSO4、AlCl3、NaOH、HCl、FeCl3、镁粉、NaNO2、A1(NO3)3，以上化学药品除H202为30％，其余全部为分析纯。 二、提取工艺流程 取短柄五加果实，除杂和烂果→80℃恒温烘干后粉碎→过40目筛→精确称取50g于索氏提取器中45℃乙醚脱脂→乙醇回流提取→石油醚除杂质并浓缩→烘干得黄酮粗粉→精确称取2g配制1%的水溶液备用。 三、实验方法： 黄酮类化合物的定性分析 黄酮类化合物的颜色反应 光谱分析 黄酮含量的测定 四、结果与分析： 4.1 颜色反应结果：取短柄五加果实乙醇提取液分别加入不同的试剂后，结果见表1 4.2 吸收光谱：芦丁、短柄五加果实黄酮液及其铝盐络合物的可见、紫外吸收光谱，见图1～4 4.3 标准曲线及黄酮含量的测定 ： 根据上述色谱分析，选择5l0nm波长作为测试波长，用比色法测得工作曲线及回归方程(图5)。 4.4 提取条件的选择 ：不同提取剂对黄酮提取量的影响 表2 不同提取剂对短柄五加果实黄酮的提取效果 4.5 不同提取温度对黄酮提取量的影响 ： 称取短柄五加果实2g／每份若干包，乙醚充分脱脂后挥去乙醚，按1：30加入75％的乙醇，在不同温度水浴提取3.5h，过滤，等体积石油醚萃取，比色法测光度，代入工作曲线及公式求出黄酮提取量(图6) 4.6 提取剂的浓度对黄酮得率的影响： 以1:30加入不同浓度的乙醇，在75℃水浴提取3.5h，按照4.4操作，得出乙醇浓度与黄酮提取量的关系(图7)。 4.7 不同料液比对黄酮得率的影响 ： 在75℃，乙醇75％时以不同的料液比提取3.5h，重复4.4操作，测得结果见图 8 4.8 提取时间对黄酮得率的影响 ： 以1:30加入75％的乙醇，75℃水浴提取1.5~5h(每次间隔30min)，得出提取时间与黄酮提取量的关系(图9)。 4.9 正交试验结果 ： 在上述单因素试验的基础上，对影响短柄五加果实黄酮提取量的因素温度、乙醇浓度、料液比、提取时间进行四因素四水平正交试验，方案及结果见表3 可见，在A3B3C3D3条件下，黄酮的提取量大于表3设计的第3号试验(A3B3C3D3)，提取率标准差仅有1.12％，按A3B3C3D3 ，设定的条件从短柄五加中提取黄酮，不仅提取率最高，而且实验稳定性强。进一步进行方差分析，结果见表5。 五、结论： 短柄五加果实中含有黄酮类化合物，以芦丁为标准试剂，测得短柄五加果实黄酮的含量约为0.939％。采用乙醇作为提取剂，其最优提取工艺条件是乙醇浓度75％、提取温度75℃、料液比1:30、提取时间3.5h。有了这些依据对于我们以后开发利用短柄五加果实中黄酮类化合物奠定了一定的基础。 * * 指导教师：张博 短柄五加是伞形目五加科五加属植物，主要分布于我国陕西北部、宁夏六盘山和陇东至天水、临潭一带，属濒危植物。在子午岭中南段--正宁县中湾林场，海拔为1110-1750m的山坡沟谷杂林中，总面积约500km2，资源丰富。具有较高的药用价值，果实入药，具有补气益精，补肾安神，祛风湿，强筋骨的作用，特别是对心脑血管和神经系统疾病有独到功效。 表1 短柄五加果实乙醇提取物的颜色反应 溶液变为橘黄色 NaOH 反应起始时的泡沫红色，溶液棕红色 镁粉+HCl 紫外光下可见淡蓝色荧光 AlCl3 溶液变为蓝色 硼氢化钠 现象 反应试剂 综合短柄五加果实乙醇提取液的颜色反应结果，乙醇提取液中含有黄酮类化合物，这些黄酮类化合物中可能包含有黄酮醇及双氢黄酮 。 通过对比芦丁及短柄五加果实的提取物的上述光谱，可见它们非常相似，二者在280、380及5l0nm处均有最大吸收峰