植物RNA快速提取.docVIP

RNA提取（TRIZOL法） 一、原理 TRIzol是一种快捷方便的总RNA提取试剂，可以从动物组织、各种微生物及细胞等中提取总RNA。在样品处理过程中，TRIzol可完全充分裂解样品，同时保持RNA的完整性。加入氯仿离心后，溶液形成上清层（水相）、中间层和有机相（下层）。取出上清层，可用异丙醇沉淀回收RNA；中间层用乙醇沉淀回收DNA；有机相可用异丙醇沉淀回收蛋白。TRIzol试剂可用于少量样品的RNA提取，也可用于大量样品的RNA提取。提取RNA 整个过程方便快速，整个操作过程可一个小时内完成，提取的RNA无蛋白和DNA的污染，纯度髙，可直接用于Northern Blotting、斑点杂交、polyA筛选、mRNA纯化、体外翻译、RNase保护分析、RT-PCR、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。 二　操作步骤 RNA提取过程的关键是建立一个无RNase的实验环境，因此在整个操作过程中要防止RNase的污染，应注意以下几点： 1.实验过程中经常更换新手套，使用专用超净台，在操作过程中避免讲话； 　　　　　　　　　　　　　　　　　2.应尽量使用无RNase的实验器材；枪头、塑料制品和玻璃制品可以用0.1％DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理过夜，然后　　　　在120℃下高压灭菌30min以去除残留的DEPC。玻璃制品也可用干热灭菌去除RNase（180℃烘烤2h）；