兽医病原菌琼脂稀释法药物敏感性试验规范-规范性审查稿.docVIP

ICS11.220 B 41 DB37 山东省地方标准 DB37/T XXXXX—XXXX 兽医病原菌琼脂稀释法药物敏感性试验规范 Performance standards for antimicrobial dilution susceptibility testsfor bacterial isolated from animals XXXX-XX-XX发布 XXXX-XX-XX实施 山东省质量技术监督局发布 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会提出并归口。 本标准主要起草单位：山东省农业科学院畜牧兽医研究所。 本标准参与起草单位：华南农业大学、中国动物卫生与流行病学中心、青岛农业大学、山东农业大学、烟台益生种畜禽股份有限公司、山东民和牧业股份有限公司、山东春雪食品有限公司、山东亚太中慧集团有限公司、山东新希望六和集团有限公司、诸城外贸有限责任公司、山东和康源生物育种有限公司、山东得利斯食品股份有限公司、齐鲁动物保健品有限公司、青岛蔚蓝生物集团有限公司、山西沃德华兽生物技术有限公司。 本标准主要起草人：刘玉庆、李璐璐、骆延波、齐静、张庆、胡明、张印、兽医病原菌琼脂稀释法药物敏感性试验规范 范围 本标准规定了兽医实验室对三种动物源常见病原菌——大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌进行药物敏感性试验的术语和定义、病原菌的制备、质控菌的选择、抗菌药物的选择与测试浓度、接种物的制备、培养基的选择、琼脂平板的培养、结果记录与统计等方面的内容。 本标准适用于兽医临床实验室使用琼脂稀释法进行药物敏感性试验。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 CLSI标准VET01-A4：动物源细菌的药物敏感性试验指南和附表VET01-S2 CLSI标准M31-A3：动物源细菌的药物敏感性试验指南 CLSI标准M31-A2：动物源细菌的药物敏感性试验指南 CLSI标准M100-S17：抗微生物药物敏感性试验执行标准，第十七版信息增刊 CLSI标准M100-S20：抗微生物药物敏感性试验执行标准，第二十版信息增刊 CLSI标准M07-A9：需氧生长细菌稀释法抗菌药物敏感性试验方法; 批准的标准—第九版 （注：CLSI为Clinical and Laboratory Standards Institute简称，临床与实验室标准协会） 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 最低抑菌浓度 Minimal inhibition concentration，MIC 在琼脂稀释法药物敏感性试验中，抗菌药物抑制病原菌生长形成肉眼可见的菌落的最低浓度。 敏感 Susceptible，S 说明（除了其他特殊情况）单独应用某一抗菌药物，在正常推荐剂量下可以有效治疗抗菌谱内细菌引发的感染。 中介 Intermediate，I 说明在体内药物生理性蓄积或者高剂量使用药物的情况下，单独使用某一抗菌药物可以治疗对应病原菌引起的感染；这一数值也指出了应该设立一个缓冲区域来避免较小的、不可控制的技术因素而引起的误差。 抗药 Resistant，R 说明抗菌药物正常推荐剂量下，抗菌效果通常受到抑制和/或容易出现特殊的抗药机制，并且在临床治疗的效果不可靠。 限制 Limited，L 目前该药物对山东省范围内菌株的MIC90，超出该值禁止使用；在R到L范围内选择MIC的浓度使用该药物。尽量选择MIC靠近R的抗菌药物使用。 仪器和试剂 仪器 96点阵药敏检测仪、电子分析天平（精度0.1mg）、高压灭菌锅、旋转混合仪、超净工作台、恒温震荡培养箱、电热恒温培养箱。 试剂 水解酪蛋白琼脂（MH琼脂，MHA）、水解酪蛋白肉汤（MH肉汤，MHB）、麦康凯琼脂、SS琼脂（Salmonella Shigella agar，SSA)、氯化钠（分析纯）。 药物敏感性试验中抗菌药物的选择 为了确保常规的药物敏感性试验的相关性和实用性，应当对试验药物的数量进行限制，包括国家允许使用的用于治疗和控制的某一类药物中的代表性药物（该类药物通常具有相同的抗菌谱），参照CLSI目前推荐的适用于试验及报告的品种目录，见附录A。 试验程序 病原菌的制备 应该尽量避免直接使用临床获得的某些样本进行药物敏感性试验，因为这些接种物的种类和数量大小难以控制。从感染的动物机体内分离的任一病原菌都应当首先在琼脂平板中进行培养并纯化，对分离菌株进行鉴定，然后选择典型的单菌落进行药物敏感性试验。 质控菌株 ATCC?25922通常适用于肠杆菌科细菌的药物敏感性试验，ATCC?29213则适用于葡萄球菌的药物敏感性试