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- 2016-07-01 发布于湖北
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2模板制备分析.ppt
植物基因组DNA-CTAB法 植物基因组DNA-CTAB法 动物基因组DNA-SDS法 基因组DNA-其它方法 吸附材料结合法: 浓盐法: 有机溶剂抽提法: 密度梯度离心法: 质粒DNA-碱裂解法 细胞器DNA-差速离心法 DNA提取的基本步骤 材料准备 细胞裂解 核酸分离、纯化 RNA提取常见问题 基因组DNA的检测 RNA提取的通用方法 异硫氰酸胍/苯酚法 原理: 细胞在变性剂异硫氰酸胍的作用下被裂解,同时核蛋白体上的蛋白变性,核酸释放; 释放出来的DNA和RNA由于在特定pH下溶解度的不同而分别位于整个体系中的中间相和水相,从而得以分离; 有机溶剂抽提,沉淀,得到纯净RNA。 中山大学药学院 步骤: 材料准备:尽量新鲜。 裂解变性:异硫氰酸胍(亚硫氢胍,巯基乙醇,N-月桂肌氨酸等)。 使细胞及核蛋白复合物变性,释放RNA,有效抑制核酸酶。 纯化分离:苯酚,氯仿,异戊醇。苯酚/氯仿可抽提去除杂物。 洗涤:70%乙醇。 沉淀:异丙醇、无水乙醇。 乙酸钠(pH4.0):维持变性的细胞裂解液的pH值,沉淀RNA。 此外还常用氯化锂选择沉淀RNA。 中山大学药学院 RNA操作中的要求 抑制RNase活性是提取RNA的关键
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