第三章第一,二节酶及细胞的固定ppt.ppt

电极活性测定型： 利用固定上的微生物细胞的新陈代谢作用，测定电极活性物质的量的变化从而确定样品中欲测物质的含量，这种传感器由固定化微生物膜与生物燃料电池、离子选择电极和气体电极等组成。 微生物传感器巳成功地用于测定可发酵性糖，葡萄糖、甲酸、乙酸，甲醇、乙醇、头孢霉素、谷氨酸、氨、硝酸盐，生化需氧量(BOD)、细胞数量等。 ３）、固定化菌体在三废处理上的应用 应用内容 菌 体 固定化方法 毒 物 废水处理 脱氮作用 Candida tropicalis Psendomonas Putida 各种微生物混合培养 Pseadomonas sp Micrococcus deritrificans 聚丙烯酰胺胶包埋 聚丙烯酰胺胶包埋 皂土和Mg＋＋或聚 氨基甲酸乙酯海绵 活性炭吸附液膜 酚 苯 废水 亚硝酸、硝酸 PP：恶臭假单胞菌，CT：热带假丝酵母 用聚丙烯酰胺凝胶包埋法将葡萄糖氧化酶固定化，制成厚度为20～50μm的酶膜，再与氧电极和使氧容易通过的聚四氟乙烯等高分子薄膜密切结合，组成葡萄糖氧化酶电极。 使用时，把酶电极浸入样品溶液中，样品液中的葡萄糖扩散到酶膜中，酶催化葡萄糖与氧反应，生成葡萄糖酸，使氧被消耗，再由氧电极测定氧浓度的变化，即可知道样品中葡萄糖的浓度。 青霉素酶电极 以固定化青霉素酶的酶膜与pH电极结合而成。将青霉素酶固定在聚丙烯酰胺凝胶或光交联树脂膜内，然后紧贴在玻璃(pH)电极上即成。 当酶电极浸入含青霉素的溶液中时，青霉素酶催化青霉素水解生成青霉烷酸，引起溶液中氢离子浓度增加，通过pH电极测出pH值变化，即可测出样品溶液中青霉素的含量。 （3） 离子敏场效应晶体管酶传感器 （4） 其它酶传感器（P214） 1、热敏电阻（图9-12） 2、光纤（图9-13） 3、声波 3、固定化酶在医疗治疗上的应用： （1）作为治疗药物 固定化酶由于其高稳定性，低免疫性，使其在作为治疗药物时，较之溶液酶，表现出极大的优势。 作为治疗药物，溶液酶具有一些“致命”弱点： ① 酶作为异体物质，反复应用会导致免疫反应 ② 酶是蛋白质，在体内易被网状内皮系统移除和被蛋白酶水解破坏。 ③ 由于稀释效应，药物酶无法集中于靶器官组织以达到治疗所需的最适高浓度。 溶液酶的这些缺点，通过选择适宜的载体与方法将它们固定化以后就能逐一地加以解决。 （2）作为“人工脏器” 固定化酶可做成“人工脏器”参与体外循环，其应用主要有两方面： a.用于除去有害的毒性物质及有潜在毒害作用的代谢废物 如清除尿毒症病人体内积累的尿素；进行这类应用时除了要考虑半寿期、免疫过敏等问题外，还要在“人工脏器”中偶联多种组成成分以彻底除去毒性产物。如处理尿素时，除了脲酶外，还要解决尿素分解生成氨的问题，这就需要另外加入谷氨酰胺合成酶或加入去氨的树脂等。 b. 除去(一种或多种)氨基酸，使需要这些物质的病变组织“饿死” 治疗时只需将患者的血液引出体外，通过由固定化酶等构成的“人工脏器”加以处理，然后再流回体内。 酶 应用方式 载体 应用对象 半寿期 优缺点 尿酸酶 门冬酰胺酶 脲酶 脂肪酶 酪氨酸酶 谷氨酰胺酶 β -葡糖苷 酸酶 β -葡糖苷 酸酶 胆红素葡糖 醛酸基转移酶 过氧化氢酶 组成体外 循环 移接 体内循环 口服 体内循环 体内循环 体内循环 体内循环 体内循环 体内循环 血液透析装置 Dacron脉管修 复用和移接管 尼龙微囊 肠衣包被 可溶性的聚顺丁烯 二酸与聚丙烯酸聚 合物 可溶性的聚乙二醇 血影细胞 脂质体 和聚乙烯吡咯烷酮 结合的微粒体 尼龙微囊 急淋白血病 尿 胰机能不全 癌瘤 癌瘤 取代和补偿 先天缺失 补偿先天缺 失 黄疸 约2d 1d 1d 24h 24h 18h 短暂 优点：加速尿酸移去 缺点：需移去尿素 优点：无免疫原性质 优点：易 缺点：消亡快；载体有毒 优点：抗酸 优点：最适pH向中性偏 优点：无抗原性半寿期长 优点：抗原性 优点：载体能被代谢 缺点：对载体内含物敏感 优点：不需分离酶 缺点：需辅助因子扩散 优点：能做成糊状 缺点：在唾液很快移除 4、 固定化酶与基础理论 用固定化酶研究亚基间关系： 在适宜的条件下将寡聚体酶的一个亚基和载体偶联固定 变性并除去其他亚基 复性及活性检测 亚基重组和酶性质的测定