1.2基因工程的操作程序资料.ppt

12.利用动物乳腺生产产品的技术称为动物乳腺反应器技术 2005年我省青岛“崂山奶山羊乳腺生物反应器的研制”项目 通过鉴定，该项目生产的药用蛋白具有表达效率高、成本 低、安全性高、易于分离纯化的优点，可产生乙肝表面抗 原及抗凝血酶Ⅲ等医药产品，造福人类健康。下图为利用 生物技术获得生物这一新品种和抗虫棉的过程，据图回答： ⑴在基因工程中，A表示????????????? ，如果直接从苏云金杆 菌中获得抗虫基因，①过程使用的酶区别于其他酶的特点 是??????????? ，B表示????????????????? 。 目的基因? 重组DNA 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且在特定的位点上切割DNA分子? ⑵在研究过程中，研究人员首先从相关基因组中获取了目 的基因，并采用____???? 技术对目的基因进行了扩增，然 后将目的基因与质粒等载体组合形成了重组载体。在重组 载体的构建过程中需要的工具酶有___________________ ⑶基因表达载体的构建是基因工程的核心，一个完整的基 因表达载体至少包括哪些部分?????????????? ??。 ⑷将目的基因导入受体细胞的过程中，在③过程中一般是 采用????????? ，在②过程中一般采用?????????????? ， 受体细胞一般是????????????????? 。 PCR 限制酶、DNA连接酶 目的基因、启动子、终止 子、标记基因 农杆菌转化法 显微注射技术 受精卵 ⑸由于转基因表达产物存在于山羊的乳汁中，检测其体内是否出现药用蛋白，在分子水平上的检测方法及结果是什么? ⑹要确定目的的基因（抗虫基因）导入棉花细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在个体水平上的鉴定过程： 从转基因羊的乳汁中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗 原—抗体杂交?如果出现杂交带，表明奶牛中出现了抗原 蛋白；如果不出现杂交带，表明奶牛中未出现抗原蛋白. 让害虫吞食转基因棉花的叶子，观察害虫的存活情况，以 确定其是否具有抗虫性状 循环 变性 退火 延伸 ④过程： a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________ b、退火（复性55℃-60℃）：系统温度降低，引 物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下， 合成与模板互补的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 IMN (1) PCR——聚合酶链式反应 是一项生物体外复制特定DNA片段的核酸合成 技术。通过此技术，可在短时间内获取大量的 目的基因。 利用PCR技术扩增目的基因 模板DNA；合成引物； 四种脱氧核苷酸；DNA聚合酶等。 (2)原理： DNA双链复制 (3)前提： 一段已知目的基因的核苷酸序列 (4)条件： (5) 过程： 变性、退火、延伸三步曲 (6)结果： 以指数形式扩增 细胞内复制 PCR扩增 DNA母链 4种　dNTP Taq DNA聚合酶 引物（2个snDNA） 温度控制 1）模板： 2）原料： 3）酶： DNA母链 4种　dNTP 解旋酶 DNA聚合酶 引物酶 DNA连接酶 DNA增殖 4）特点: 半保留复制 边解旋边复制 (不用DNA连接酶) 半保留复制 全解旋再复制 3.人工合成： ——根据已知的核苷酸序列合成DNA 二、基因表达载体的构建——核心 质粒 目的基因 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 表达载体 同一种 1.过程: a、使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代 b、同时使目的基因能表达和发挥作用 思考：作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？ 2、基因表达载体的作用 3.基因表达载体的组成： 它们有什么作用？ a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端,是RNA聚合酶识别和结合部位，驱动基因的转录 位于基因的末端,也是一段有特殊结构的DNA片段终止转录 鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有含有目的基因的细胞筛选出来 常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 将目的基因导入受体细胞的原理 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 三、将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入受体细胞 1.将目的基因导入植物细胞----农杆菌转化法 转化 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 目的基因进入受体细胞，并在受体细胞内维持稳定和表达 农杆菌转化法 适用于 双子叶植物 裸子植物 适用于 单子叶植物 基因枪法 花粉管通道法 适用于 被