实验六、植物基因组DNA提取.pptVIP

实验 六 植物基因组DNA提取 一、实验目的 1、掌握提取DNA的方法，该方法提取的DNA可用作PCR模板、限制性酶切反应和Southern印迹分析。 2、提取银杏叶片总DNA，并通过琼脂糖凝胶电泳分析检测所提取DNA的纯度和完整性。 二、材料、试剂和仪器 材料：银杏成熟叶片 试剂： （1）DNA提取液：100 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0), 2100 mmol/L NaCl , 50 mmol/L EDTA , 20g/L PVP , 20g/L CTAB , 140 mmol/L β-ME (β-ME在使用前加) （2）氯仿：异戊醇(24:1), 无水乙醇 , 70%乙醇 （3）琼脂糖、50×TAE缓冲液 等 三、原理 利用液氮对植物组织进行研磨，破碎细胞，提取液中的十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）溶解膜蛋白，破坏细胞膜，使蛋白质变性而沉淀。EDTA抑制DNA酶活性。再用氯仿抽提去除蛋白，得到的DNA用异丙醇或乙醇沉淀。 一般生物体基因组DNA约107-8bp。 制备基因组DNA的方法都要考虑两个原则：〈1〉防止和抑制内源DNase对DNA的降解；〈2〉尽量减少