8沙门氏菌的检测5解说.pptVIP

沙门氏菌的检测 授课教师：汪清美 一、实验目的 1.掌握沙门氏菌属的检测方法 2.了解沙门氏菌的基本生化反应及原理 二、实验器材 1.菌种：沙门氏菌、大肠杆菌 2.检样：鲜鸡蛋 3.培养基：四硫磺酸钠黄绿（TTB）增菌液；氯化镁孔雀绿增菌液（MM)；亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液；亚硫酸铋（BS）琼脂；HE 琼脂；SS琼脂；三塘铁琼脂（TSI） 4.设备：冰箱、恒温培养箱、均质器、振荡器、电子天平、无菌锥形瓶、无菌吸管、 无菌培养皿、无菌试管、无菌毛细管 1.四硫磺酸钠黄绿（TTB）增菌液 基础液 900 mL 硫代硫酸钠溶液 100 mL 碘溶液 20.0 mL 煌绿水溶液 2.0 mL 牛胆盐溶液 50.0 mL 临用前，按上列顺序，以无菌操作依次加入基础液中，每加入一种成分，均应摇匀后再加入另 一种成分。 蛋白胨 10.0 g 蒸馏水 1 000 mL pH 7.0±0.2 牛肉膏 5.0 g 氯化钠 3.0 g 碳酸钙 45.0 g（碳酸钙可以调节ph,是培养基在养菌过程中维持一定ph,否则ph过低,影响菌株生长 另外还有筛选产酸菌的作用） 除碳酸钙外，将各成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，再加入碳酸钙，调节pH，高压灭菌121 ℃，20 min 硫代硫酸钠溶液 硫代硫酸钠（含5 个结晶水） 50.0 g 蒸馏水 加至100 mL 高压灭菌121 ℃，20 min。（硫代硫酸钠作为中和剂，可以灭菌121,15min，没有影响的，检验含有次氯酸钠的消毒水微生物，需要加入1.5%硫代硫酸钠溶液；培养基中硫代硫酸钠和磺所生成的四硫磺酸，能抑制大部分大肠埃希氏菌的生长，而伤寒与副伤寒沙门氏菌仍能生长，因为沙门氏菌具有四硫磺酶，能分解四硫磺酶。） 　ＴＴＢ培养基使用方法和注意事项 　 1.使用方法：称取本品93.55g，溶解于1050ml蒸馏水中，加热溶解，临用前加入20％碘液20ml,0.5g煌绿2ml。 2.注意事项：ＴＴＢ培养基不加碘液可在4-10度冰箱保存。加入碘液后必须在几小时内使用。培养基中有白色碳酸钙沉淀为正常现象。 3.原理：四硫酸钠是由硫代硫酸钠和碘经氧化生成而来，它对大肠菌群有抑制作用，对沙门氏菌无影响。因沙门氏菌具有四硫磺酸酶，能分解四硫磺酸钠，而大肠菌群没有这种酶，故生长受抑制。碳酸钙为缓冲剂，可使沙门氏菌不致因酸碱度改变而死亡。 2.氯化镁孔雀绿增菌液（MM) 甲液：胰蛋白胨5g； 磷酸二氢钾1.6g ；氯化钠8g蒸馏水1000ml； 2.乙液：氯化镁40g；蒸馏水100ml 3.丙液：0.4%孔雀绿水溶液 4.制法 :上述成分配好后，121度高压灭菌15min，临用时取甲液90ml；乙液9ml 丙液0.9ml MM增菌液各成分的作用 胰蛋白胨提供氮源和碳源满足细菌生长的需求； 氯化钠可维持均衡的渗透压； 磷酸二氢钾是缓冲剂； 氯化镁可以增加培养基的渗透压； 孔雀绿抑制非沙门氏菌的生长， 较低的pH结合氯化镁和孔雀绿使培养基具有较高的选择性。 3.亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液 成分 蛋白胨 5.0 g 乳糖 4.0 g 磷酸氢二钠 10.0 g 亚硒酸氢钠 4.0 g L-胱氨酸 0.01 g 蒸馏水 1 000 mL pH 7.0±0.2 制法 除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸外，将各成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，冷至55℃以下，以无菌操作加入亚硒酸氢钠和1g/L L-胱氨酸溶液10 mL（称取0.1 g L-胱氨酸，加1mol/L 氢氧化钠溶液15mL， 使溶解，再加无菌蒸馏水至100mL 即成，如为DL-胱氨酸，用量应加倍）。摇匀，调节pH。 SC增菌液各成分的作用 4.亚硫酸铋（BS）琼脂 蛋白胨 10.0g 牛肉膏 5.0g 葡萄糖 5.0g 硫酸亚铁 0.3g 磷酸氢二钠 4.0g 煌 绿 0.025g 或5.0g／L 水溶液5.0mL 柠檬酸铋铵 2.0g 亚硫酸钠 6.0g 琼 脂 18.0g～20g 蒸馏水 1000mL pH7.5±0.2 将前三种成分加入300 mL 蒸馏水（制作基础液）， 硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入20 mL 和30mL 蒸馏水中，柠檬酸铋铵和亚硫酸钠分别加入另一20 mL 和30 mL 蒸馏水中， 琼脂加入600 mL 蒸馏水中。然后分别搅拌均匀，煮沸溶解。冷至80 ℃左右时，先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀，倒入基础液中，混匀。将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀，倒入基础液中，再混匀。调节pH，随即倾入琼脂液中，混合均匀，冷至50 ℃～55 ℃。加入煌绿溶液，充分混匀后立即倾注平皿。 BS培养基的原理 1.蛋白胨、牛肉膏粉提供碳源和氮源； 2.葡萄糖提供能源 3.亚硫酸铋抑