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* * 第七章 吸光光度法 吸光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法，包括比色法、可见及紫外吸光光度法及红外光谱法等。我们重点讨论可见光区的吸光光度法。 一、光知识基础 §7-1 吸光光度法的基本原理 1. 光学光谱区 （真空紫外） 远红外 中红外 近红外 可见 近紫外 远紫外 10nm~200nm 200nm ~400nm 400nm ~ 760nm 760 nm ~ 2.5 ?m 2.5 ?m ~ 50 ?m 50 ?m ~300 ?m 2. 光的基本性质(电磁波的波粒二象性) c －真空中光速 ~3.0 ×108m/s ?－波长，单位：m、cm、mm、?m、nm、? 1?m=10-6m，1nm=10-9m，1?=10-10m ?－频率，单位：Hz 次/秒 n －折射率，真空中为1 光的传播速度: (1) 波动性 h－普朗克(Planck)常数 6.626×10-34J·s ?－频率 E－光量子具有的能量 单位：J(焦耳)，eV(电子伏特) 1eV=1.602×10-19 J (2) 微粒性 光量子，具有能量。 结论:一定波长的光具有一定的能量，波长越长(频率越低)， 光量子的能量越低。 单色光：具有相同能量(相同波长)的光。 复合光：具有不同能量(不同波长)的光复合在一起。如白光 (3) 波粒二象性 真空中: 不同颜色的可见光波长及其互补光 红 620 ～ 760 青蓝 橙 590 ～ 620 蓝 黄 560 ～ 590 紫 绿 500 ～ 560 红 青 480 ～ 500 黄 蓝 430 ～ 480 绿 紫 400 ～ 430 互补光/物质颜色 吸收光颜色 ?/nm 青 3. 物质的颜色及对光的选择性吸收 物质的颜色是因物质对不同波长的光具有选择性吸收作用而产生的。 *单色光(monochromatic light)：具同一波长的光。 *复合光(multiplex light)：由不同波长组成的光。 *紫外光(ultraviolet light)：波长200~400nm。 *可见光(visible light)：人眼能感觉到的光，波长在400~760 nm。它是由红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等各种色光按一定比例混合而成的。 *波段(wave band)：各种色光的波长范围不同。 *互补色光(complementary color light)：按一定比例混合，得到白光(white light)。 吸收光谱曲线或光吸收曲线(absorption curve)：以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图。 最大吸收波长(maximum absorption wavelengh)：光吸收程度最大处的波长，用λmax表示。 吸光度(absorbance) A 吸收带的形状、λmax和?max与吸光分子的结构有密切的关系。各种有机化合物的λmax和?max都有定值，同类化合物的?max比较接近，处于一定的范围。 二、光 吸收曲线 Cr2O72-、MnO4-的吸收光谱 300 400 500 600 700 ?/nm 350 525 545 Cr2O72- MnO4- 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 Absorbance 350 苯和甲苯在环己烷中的吸收光谱 苯(254nm) 甲苯(262nm) A ? 230 250 270 不同物质吸收光谱的形状以及?max 不同 ——定性分析的基础 同一物质，浓度不同时，吸收光谱的形状相同，Amax 不同 ——定量分析的基础 三、光吸收定律 (紫外-可见分光光度法进行定量分析的理论基础) 朗伯-比尔定律 A－吸光度 I0－入射光强度 It－透射光强度 T－透射比，透光度 K－吸光系数 b－吸收池厚度 c－吸光质点的浓度 溶液的透射比愈大，表示它对光的吸收愈小;相反，透射比愈小，表示它对光的吸收愈大。 吸光系数K与吸光物质的性质、入射光波长及温度等因素有关，与溶液浓度大小和液层厚度无关。 1. 表达式： I0 I 入射光 透过光 2. 物理意义 当一束平行单色光垂直通过均匀、透明的吸光物质的稀溶液时，溶液对光的吸收程度(吸光度)与溶液的浓度和吸收池厚度的乘积成正比。 讨论： (1) Lambert-Beer定律的适用条件 入射光为单色光 溶液是稀溶液 (2) 该定律适用于均匀非散射的液体、气体及透光固体 (3) 适用于可见光、紫外光和红外光区 用参比溶液调T=100%(A=0)，再测样品溶液的吸光度，即消除了吸收池对光的吸收、反射，溶剂、试剂对光的吸收等。 3. 吸光系数(Absorptivity)